电泳的应用-YC程序.ppt

电泳的应用 生化第三组 制 一、电泳的发展历程 二、电泳的分类 二、电泳的分类 二、电泳的分类 三、电泳的应用 三、电泳的应用 细胞电泳 移界电泳 等速电泳 等电聚焦电泳 纸带电泳 醋酸纤维薄膜电泳 琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 双向凝胶电泳 双向凝胶电泳的应用 免疫电泳 毛细管电泳 毛细管电泳 总结 * 上世纪60-70年代 1937 1809 俄国物理学家Peнce首先发现了电泳现象 瑞典的Tiselius建立了分离蛋白质的界面电泳 电泳技术才开始应用 滤纸、聚丙烯酰胺凝胶等介质相继引入电泳 电泳技术迅速发展 丰富多彩的电泳形式使其应用十分广泛 上世纪80年代 新发展起来的毛细管电泳技术，是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展 医药 电泳喷漆与五金表面处理 小分子物质的分离、分析 工业 泳 漆 电泳 (工业) 电 镀 20世纪60年代由福特汽车公司最先应用于汽车底漆。由于其出色的防腐、防锈功能，很快在军工行业得到广泛应用 近几年才投入运用的，利用电解原理在某些金属表面上镀上一薄层其它金属或合金的过程，是利用电解作用使金属或其它材料制件的表面附着一层金属膜的工艺 电泳 (医药) 自由电泳 区带电泳 滤纸电泳（常压及高压） 粉末电泳（纤维素粉，淀粉，玻璃粉电泳） 薄层电泳（薄膜及薄板） 凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯 酰胺凝胶） 缘线电泳（如尼龙丝，人造丝电泳） 等速电泳 等电聚焦电泳 需使用专用电泳仪，电泳平衡后，各电泳区带相随，分成清晰界面，以等速向前运动。 两性电解质在电场中自动形成pH梯度，当被分离的生物大分子移动到各自等电点的pH处聚集成很窄的区带。 稳态电泳 自由电泳与显微技术的组合，利用不同细胞或同种细胞不同状态的PI不同进行分离。 细胞电泳 自由流动幕电泳 一种制备用的连续电泳 移界电泳 在层析柱中进行的电泳 柱电泳 电泳 (医药) 免疫电泳 毛细管电泳 双向凝胶电泳 第一向采用等电聚焦电泳 将复杂的PI不同的蛋白质进行分离。 第二向采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）按蛋白质分子量的大小在垂直方向进行分离 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 放射免疫对流电泳 免疫固定电泳 酶标对流免疫电泳 毛细管区带电泳（CZE) 毛细管凝胶电泳(CGE) 毛细管胶束电动色谱(MECC) 毛细管等电聚焦电泳(CIEF) 毛细管等速电泳(CTTP) 毛细管电色谱非(CEC) 水介质毛细管电泳（NACE） 1.涂层丰满、均匀、平整、光滑2.硬度、附着力、耐腐、冲击性能、渗透性能明显优于其它涂装工艺3.采用水溶性涂料，节省了大量有机溶剂，大大降低了环境危害，避免了火灾的隐患 泳漆 广泛应用于汽车、火车、飞机外壳;冰箱、洗衣机、空调等家电金属外壳着漆 电镀 防止腐蚀，提高耐磨性、提高导电性、提高反光性及增进美观 广泛应用于金属灶台、洗碗池、水龙头锁具，硬币，首饰，汽车耐磨部分等的表面处理 应用： 各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞荷电量有所不同，故在一定的电场中的泳动速度不同。尚可用来分离不同种类的细胞，例如可把淋巴样细胞与造血细胞分开。 恒定的电场下，同种细胞的电泳速度相当稳定，因而可通过测定电泳速度来推算出细胞的ξ电位。 ξ电位常因细胞生理状态和病理状态而异，因此在诊断疾病上有一定价值。 (在一定pH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动，这种现象称为细胞电泳。引起细胞电泳的电位值称为ξ电位) 即在显微镜下直接观察细胞或细菌等的电泳行为 1937年瑞典Uppsala 大学的Tiselius 用蛋白质的移动界面电泳方法，并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ 球蛋白组成的，并获得了1948年的诺贝尔化学奖。 应用：初步分离血清蛋白 采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动，实现分离。 等速电泳示意图 应用：初步分离样品组分 等电聚焦电泳是从凝胶电泳发展而来的，在凝胶中通过加入两性电解质形成一个pH 梯度，两性物质在电泳过程中会被集中在与其PI相等的pH区域内，从而得到分离。 ①使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度， ②由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面； ③电泳速度快; ④分辨率高; ⑤加入样品的位置可任意选择； 等电聚焦可以用于测定某个未知蛋白质的等电点 等电聚焦具有很高的灵敏度，特别适合于研究蛋白质微观不均一性 同工酶之间可能只有一两个氨基酸的差别，利用等电