生化考题.docVIP

模体与结构域的区别 答：模体（motif）即超二级结构，简言之，就是二级结构有规律的组合。例如螺旋-环-螺旋，贝塔折叠的组合、阿而法螺旋组合等。再比如亮氨酸拉链、锌指结构都是典型的模体，它们执行一定的功能，即模体即是结构的单位，又是功能单位，他们可直接作为结构域和三级结构的建筑块。某些蛋白质因子与DNA大沟结合的 部位靠的就是某些特异的模体。 结构域（domain）是指在较大的蛋白质分子中形成的某些在空间上可以辨别的结构，往往是球状压缩区或纤维状压缩区。它们也既是结构单位，又是功能单位。例如免疫球蛋白的功能区就是结构域。显然模体与结构域是不同的概念。增强可溶性和蛋白的正确折叠： 为避免包涵体的生成，一切能够降低蛋白质合成速率的条件均适合。温度：建议低温过夜诱导。裂解buffer：可以加入去污剂将与膜粘连的蛋白提出来。定位在周质或者胞质中表达（用有信号肽的载体等，在这种环境中利于形成二硫键，折叠正确）。2.正确选择宿主菌，比如说一些有稀有密码子的，用origami，或者rosetta。 3.有毒的基因，用petcoco系统不错。 4.还可以好几个target proteins共表达，pet系列有许多商品化的东西。借助于细胞的分子伴侣机制来提高正确折叠的蛋白质的产量。 血红蛋白氧化时构象变化的要点 答： 血红素中的铁与O2F8拉直，并带动附近肽链的运动，结果导致αβ亚基相对于另一对αβ亚基转动15°角。如果将 4个亚基标记为α1，α2，β1和β2，则α2β2之间和α1间接触面较牢固，没有改变，变动最大的是α1β2（或α2β1）间的接触面，α1β2（α2β1）界面的变动是T态向R态转变的开关（反之亦然）。在T态向R态转变时，盐桥破坏，当O2释放时，又通过该界面的滑动，盐桥重新恢复，R态又能转变成T态。α1β2（α2β1）界面的氨基酸序列是相当保守的，如在这一序列范围内发生突变则对别构效应有较大影响。 血红蛋白氧饱和曲线与功能的关系 答：Hb的氧离曲线呈S形对机体有着重要的生理意义：保证机体各组织对氧的需要 S形曲线上端，PO22有较大程度的结合。 S形曲张中段，PO2O2的变动范围，故保证了血液流经氧分压较低的组织时，即使PO2有较少的下降，血氧饱和度却有明显的增加，从而释放较多的O2供组织需要。 酵母双杂交的原理 答： 很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（DNA-binding domain，BD）与转录激活域（Transcriptional activation domain ，AD）。这两个结构域各具功能，互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。不同来源激活因子的BD区与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。基于这个原理，可将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用。 酵母双杂交系统由三个部分组成： 1 与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白 bait 。 2 与AD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称靶蛋白 prey 。 3 带有一个或多个报告基因的宿主菌株。常用的报告基因有HIS3，URA3，LacZ和ADE2等。而菌株则具有相应的缺陷型。双杂交质粒上分别带有不同的抗性基因和营养标记基因。这些有利于实验后期杂交质粒的鉴定与分离。根据目前通用的系统中BD来源的不同主要分为GAL4系统和LexA系统。后者因其BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。SA，末端常为 SA、Fuc 糖基排列 二糖分子连成长链 大多为分支寡糖链 与肽链连接方式 一般为O-糖苷键连接，有时可游离存在 O-糖苷键或N-糖苷键 分布 主要在细胞外，各种结缔组织基质中 分布广泛，细胞内外皆有 生理功能 以维持结缔组织的功能为主 作用广泛，许多粘蛋白血浆蛋白、膜蛋白等为糖蛋白蛋白的糖肽连接键，简称糖肽键。糖肽链的类型可以概况为： N- 糖苷键型：寡糖链（ GlcNAC 的β - 羟基） 与 Asn 的酰胺基、 N- 未端的 a - 氨基、 Lys 或 Arg 的 W- 氨基相连 O- 糖苷键型：寡糖链（ GalNAC 的α - 羟基） 与 Ser 、 Thr 和羟基赖氨酸、羟脯氨酸的羟基相连。 S- 糖苷键型：以半胱氨酸为连接点的糖肽键。 酯糖苷键型：以天冬氨酸、谷氨酸的游离羧基为连接点。内含子和外显子、.基因家族和假基因、重复DNA序列人类结构基因4个区域：编码区