第一节克隆载体题库.ppt

λ噬菌体载体的选择: 并没有一种可以适于克隆所有DNA片段的入噬菌体载体。具体选择时，应该考虑以下几点： ① 如果要从染色体DNA来构建基因组文库，那么可以选择置换型的λ噬菌体载体，因其可容纳DNA较大片段。 ② 如果要从染色体DNA中分离某一基因，而又不需构建完整基因组文库，那么选择的自由度就较大。 ③ 如果需要构建cDNA文库，那么常选λgt10或λgt11插入型载体；如果考虑选用抗体探针，那么常选λgt11这一有效表达载体。 （二） M13噬菌体 为了测序的需要，可应用丝状噬菌体产生单链DNA M13为丝状噬菌体家族成员，含有长度约为6400碱基的单 链DNA基因组。 M13是一种丝状病毒颗粒，它只能感染雄性细胞菌，并 不裂解宿主，相反，它甚至要从继续生长和分裂的感染 细胞中释放出来。 感染时，单链噬菌体基因组转变成称为复制型（RF 的双链环 状结构，它以凯恩斯复制 θ型复制 。然后，RF分子以滚环方 式产生单链正链子代DNA分子，RF分子也作为M13噬菌体11个 基因进行转录的模板。 三个病毒基因产物（pⅡ,p Ⅴ pⅩ）用于病毒DNA的复制，五个 病毒基因编码跨膜蛋白（p Ⅲ ,pⅥ,pⅦ,pⅧ,pⅨ 构成外壳。 子代病毒颗粒是通过一个协同过程组装而成的。衣壳蛋白突入 细菌细胞膜，并围绕正链子代DNA装配，这一蛋白－DNA复合物 以丝状病毒颗粒形式分泌出细胞。