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现代生化实验技术试卷 （食品学院 农产品加工与贮藏工程09级 研究生用） 姓名 学号 成绩 1. 分离纯化生物大分子的方法有哪些？2. 蛋白质分离纯化技术中哪些与它的等电点有关？试述这些技术分离提纯蛋白质的原理。等电聚焦电泳将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀等电聚焦电泳pH梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。 3.一种相对分子质量为28000、PI为5.5的酶被一种相对分子质量类似、但PI为7.0的蛋白质和另外一种相对分子质量为120000、PI为5.4的蛋白质污染。试提出一种纯化该酶的方案。 4.一个蛋白质混合物含有下面几种不同的组分： A Mt 12000 PI 10.0; B Mt 62000 PI 4.0; C Mt 28000 PI 7.0; D Mt 9000 PI 5.0。 不考虑其他因素，分别指出在下述情况下被洗脱的顺序。（1）该混合物用DEAE-纤维素柱层析时，以逐渐提高洗脱液的盐浓度方式进行洗脱。（2）该混合物用SephadexG-50凝胶进行柱层析。 5.一套标准相对分子质量蛋白在适当条件下用葡聚糖凝胶颗粒柱层析确定它们的洗脱体积，获得如下表的数据： 蛋白质 相对分子质量/Mt 洗脱体积/mL 人γ-球蛋白 158000 57 人转铁蛋白 88000 67 牛血清蛋白 67000 70 卵白蛋白 45000 74 胰凝乳蛋白酶原 25000 85 马肌红蛋白 16900 88 牛心细胞色素c 13400 91 6. 什么是反相液相色谱法？什么是正相液相色谱法？列出高效液相色谱法常用的几种检测器并说明它们适用的分析对象及适用范围。 适用的分析对象是对温度敏感，要求检测器的温度控制精度为10-3℃。7. 试结合自己在研一阶段所进行的实验研究写一些实验中的心得体会。（15分） 答：目前我还没有进入实验室，所在在这方面就没办法回答，我现在主要的任务是阅读文献，个人认为文献是试验进行的前提和基础，有了坚实的理论基础，实验进行就会变得顺手的多！我在查找文献时主要是通过学校图书馆链接的中国知网和把主题发给外校同学也在他们的学习数据库收集文献。 一未知相对分子质量的蛋白质在相同条件下洗脱体积为80 mL，试计算出该蛋白质的相对分子质量。（15分）