现代基因工程_05怎样获得特定基因的克隆概念.ppt

免疫学检测方法需要的抗体 如果把纯化后的蛋白质样品注射进兔子的血液循环系统中，它的免疫系统将产生抗体来结合和帮助降解这些外源分子[图8-17(a)]。 一旦兔子被某种外源蛋白质所激发，它血液中的足以用来纯化的高抗体水平将会持续好几天。只要10 mL的血液就能提供相当多的抗体[图8-17(b)]。 被纯化后的抗体，有特异性，只能与最初被注射进兔子体内的蛋白质相结合。 用纯化后的抗体检测重组体的蛋白质 有好几种免疫学筛查的方法，但最常用的是直接配对检出。 把重组体克隆转移到聚脂膜上，裂解细胞，再加上包含特定抗体的溶液。 为了便于检出，或者抗体本身直接标记，或者抗原抗体结合后，用标记后的蛋白A(protein A)溶液洗膜。蛋白A是一种细菌蛋白，可特异地与免疫球蛋白(抗体的主要成分)相结合。 标记可以选择放射性元素，以这种方式结合的标记将通过放射自显影而被检测出来；或者也可以用荧光或者化学发光的信号作标记。 5.4.1 互补核酸链的相互杂交 任意两条单链核酸分子都有相互形成碱基对的趋势。但形成的大多数分子对由于只有少数链间氢键形成，杂交结构并不稳定。 但如果多聚核苷酸链是互补的，碱基对的大量形成使双链分子稳定。 这一现象不仅仅发生在单链DNA分子之间形成DNA双螺旋，单链RNA分子之间以及单链RNA与单链DNA之间也可以杂交。 如果用目的基因的互补DNA或RNA作探针，就可利用