RP―HPLC法测定白芍愈伤组织中芍药双苷的含量.docVIP

RP―HPLC法测定白芍愈伤组织中芍药双苷的含量 　　【摘 要】目的：建立测定芍药愈伤组织中两种有效成分――芍药苷和芍药内酯苷――的反相高效液相色谱分析方法。方法：以SinoChrom ODS-BP（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱；乙腈-0.05%磷酸二氢钾（v/v，11：89）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为230 nm，柱温为30 ℃。结果：在此色谱条件下芍药苷与芍药内酯苷可完全分离，在一定范围内均表现出良好的线性关系，平均加样回收率（n=5）分别为101.67%和98.59%，RSD均小于 2%。结论：本研究建立了一种能快捷简便、准确有效、重现性好的芍药愈伤组织有效成分的检测方法，为进一步优化愈伤组织的培养条件提供了重要保证。 　　【关键词】RP-HPLC；白芍愈伤组织；芍药苷；芍药内酯苷； 定量测定 　　【文章编号】1004-7484（2014）07-4153-02 　　【Abstract】AIM：To establish a sensitive RP-HPLC method for determining the active ingredient content of peoniflorin and albiflorin in Paeonia lactiflora Pall. callus cultivated in subculture process. METHODS：The separation was performed on SinoChrom ODS-BP column （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， with acetonitrile and 0.05% potassium dihydrogen phosphate solution （v/v， 11：89） as mobile phase， detected at 230 nm wavelength， and the flow rate was 1.0 mL/min. RESULTS：The standard curves of peoniflorin showed a good linearity in a certain range. CONCLUSION：The method is accurate， reliable and suitable for determination of albiflorin and paeoniflorin in Paeoniae radix Alba callus simultaneously. It lays a foundation for further condition optimization of callus culture to produce albiflorin and paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba. 　　【KEY WORDS】RP-HPLC； Paeoniae radix Alba callus； peoniflorin； albiflorin； quantitative determination 　　中药材白芍是毛茛科植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，主产于浙江、四川、安徽等省。白芍气微，味微苦、酸，具有养血、柔肝、敛阴、收汗、缓急止痛等功效。白芍的主要药效成分是属于单萜苷类化合物[1]、以芍药苷和芍药内酯苷（二者合称为芍药双苷）为主要成分的芍药总苷。在中国药典2010版中，已将芍药总苷作为白芍的质量控制指标[2]。现代药理研究表明，芍药总苷能通过多途径抑制自身免疫反应[3]，因而具有抗炎、止痛、保肝和抑制自身免疫等多种药理作用，目前在临床已用于对类风湿性关节炎的治疗，并取得了良好的治疗效果[4]。传统的芍药双苷生产方法是从白芍中提取，而野生芍药需在种植生长3～4年后，其根晒干炮制得到白芍（干燥根），且其中芍药双苷的含量不高（1%），导致芍药双苷的生产成本较高。此外，天然植株中芍药双苷的合成与积累还受到生长产地、季节、气候、栽培管理水平等多种因素的影响，导致它们的含量常常低于这一水平。针对这些问题，我们开展了芍药愈伤组织的诱导和培养研究，以期通过诱导并规模化培养芍药愈伤组织，缩短芍药细胞中芍药双苷的积累时间，并通过对愈伤组织细胞培养条件的有效控制，促进细胞中芍药双苷的积累，提高细胞中芍药双苷的含量。目前，我们已经成功获得了由芍药的根、茎、叶、叶柄等不同外植体诱导产生的愈伤组织，并实现了愈伤组织的连续继代培养。因此，目前迫切需要一种准确、有效的方法来提取并检测愈伤组织细胞中的芍药双苷含量。 　　虽然目前已有提取和测定白芍中芍药苷和芍药内酯苷