植物与青贮饲料中可溶性糖的提取与测定.docVIP

植物与青贮饲料中可溶性糖的提取与测定 原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当糖的量在２０－２００mg范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可用比色定量。 材料:过40目的植物或青贮饲料粉末 70度烘干48小时后,粉碎过筛 试剂: 葡萄糖标准溶液:0.1000g葡萄糖 分析纯 溶于20ml蒸馏水中,定容于100ml.制标准曲线时,吸1ml此溶液,稀释10倍 密度为100ｕg/ml 蒽酮硫酸指示剂:称0.2000g蒽酮溶于100ml浓H2SO4 1.84 中,当日配制使用. 步骤: 样品中可溶性糖的提取:称取约0.3-0.5g 精确到0.0001g 样品倒入25ml试管中,再加15ml煮沸的蒸馏水,塞上塞子,在90度水浴中振荡提取40分钟,过滤，并用少量蒸馏水洗滤纸上的残渣，使WSC全部流到滤液中；对滤液再加入少许 约0.010g 活性碳,90度脱色30min,过滤, 并用少量蒸馏水洗滤纸上的残残渣，将滤液用蒸馏水定容至50ml 视材料而定也可以是100ml或500ml .取1ml此糖提取液,加入4ml蒽酮硫酸试剂,在冰水中冷却 加盖防止蒸发 .再在100度沸水中提取,当沸水重新沸起后,准确煮沸10分钟后取出,用流水冷却后,放置10分钟,在620nm下比色,测吸光值. 标准曲线制作: 取6只大试管,配制不同浓度的葡萄糖溶液 编号 0 1 2 3 4 5 蒸馏水ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 标准溶液添加量ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 葡萄糖糖含量ｕg/ml 0 20 40 60 80 100 在支试管加入蒽酮硫酸试剂4.0ml,在冰水中冷却 加盖防止蒸发 . 再在100度沸水中提取,当沸水重新沸起后,准确煮沸10分钟,用流水流水冷却后,放置10分钟,在620nm下比色,测吸光值.最后以葡萄糖含量为横坐标,以吸光度为纵坐标,作出标准曲线. 结果处理: 样品中含糖量 % 测出的糖量 ｕg ×稀释倍数×100/样品重量/1000000 注意: 试管与离心管,溶量瓶一定要洗干净;加热,比色时间要准确.