仪器——4、高效液相色谱法答题.pptVIP

3、液-液色谱法的固定相 常用的固定液：如极性的β，β′氧二丙腈（ODPN），非极性的十八烷（ODS）和异二十烷（SQ）等。 缺点：涂渍的固定液易被流动相冲掉。采用化学键合固定相则可以避免上述缺点。使固定液与担体之间形成化学键，例如在硅胶表面利用硅烷化反应： 形成Si—O—Si—C型键，把固定液的分子结合到担体表面上 有机氯硅烷 优点： 化学键合固定相无液坑，液层薄，传质速度快，无固定液的流失，寿命长。 固定液上可以结合不同的官能团，选择性好。 固定液不会溶于流动相，有利于梯度洗提。 4、液-液色谱法的应用 液-液色谱法既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物，如烷烃、烯烃、芳烃、稠环、染料、甾族等化合物。化合物中取代基的数目或性质不同，或化合物的相对分子质量不同，均可以用液-液色谱进行分离。适合同系物的分离，如氨基酸。 三、离子交换色谱法 原理：离子交换色谱法是基于离子交换树脂上可离解的离子与流动相中具有相同电荷的被测离子进行可逆交换，由于被测离子在交换剂上具有不同的亲和力而被分离。 1、离子交换色谱法的作用机制 聚合物分子骨架上连接着活性基团，如—SO3－，—N(CH3)3+等。 为保持树脂的电中性，活性基团上带有电荷数相同但正、负号相反的离子X，称为反离子。 * 高效液相色谱法 （High Performance Liquid Chromatography，HPLC） §1 概述 §2 高效液相色谱仪 §3 HPLC的分类及其分离原理 §4 高效液相色谱分离的选择 液相色谱仪 §1 概述 一、HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，基本概念理论一致 主要差别：分析对象、流动相及操作条件的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、分子量较小的样品，仅能分析有机物的20%。 HPLC：高沸点、难气化、分子量大、热稳定性差及具有生理活性和离子型的样品均可检测，用途广泛，占有机物的80%。 2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了控制因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性、组成和pH值的选择也对分离起到重要作用 3．操作条件差别 GC：加温操作; HPLC：多室温；高压 二、影响分离的因素与提高柱效的途径 在HPLC中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项较小，可以忽略。 H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。液相色谱中一般不通过增加柱温来改善传质（温度影响不显著）。恒温 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 三、HPLC的特点： (1)高压：液体流过色谱柱时，所遇到的阻力很大（液体粘度大），为了使载液迅速通过色谱柱，必须对载液施加高压。HPLC工作压力高达20MPa∽30MPa。 (2)高速：HPLC的分析时间较经典的液相色谱所需的时间要少得多，分离一个样品只需几分钟至几十分钟，仅为经典液相色谱的几十分之一。 (3)高效：一般GC的色谱柱是数千塔板／米，HPLC的塔板数可达约3万塔板/米，使分离效率大大提高。 (4)高灵敏度：紫外光度检测器的检测限可达10-9g，荧光检测器可达10－11g 。 HPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。 HPLC的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。凡是能用GC分析的样品一般不用HPLC。 五个部分：高压输液系统、进样系统、色谱柱、检测系统、记录仪。 §2 高效液相色谱仪 数据分析系统 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 * 数据处理系统 HPLC组成 一、高压输液系统 高压输液系统由贮液器、高压泵、梯度洗提装置组成，核心部分是高压泵。 1、贮液器及流动相 高效液相色谱的流动相应满足如下要求： (1)应具有足够的纯度，一般选用色谱纯试剂。 (2)流动相与固定液应互不相溶。 (3)流动相对试样各组分应有适当的溶解度。 (4)粘度小。 (5)检测器对流动相不产生响应。 溶剂使用前要脱气 因为色谱柱是带压操作的，而检测器是在常压下工作。若流动相中含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子后到检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声大，使基线不稳，仪器不能正常