第4次课 天然产物研究实验室技术2(纯化).pptVIP

五、棒色谱 （Stick Chromatography 1 简介 与制备型薄层色谱原理相同,分离量大。把硅胶、氧化铝等制成园柱形的棒，下端上样，上行展开而达到分离目的。 2 操作 制棒 上样 展开 引导座－－两端相通，内填层析硅胶 展开装置－－层析槽，密封罩 收集 3 应用 生物碱、皂苷、甾醇等 加压柱色谱 （Pressure Liquid Chromatogr.） 类型 低压柱色谱 加压柱层析 中压柱色谱 高压柱色谱 优点 分离因子 a 高，故能完成复杂的分离过程 （ a 两组分的相对保留时间之比，分离因子是评价色谱柱选择性的一种指标） 制备型与分析型的区别： 分析型：不要求样品回收 制备型：要求样品载量高，因此便要求有特殊的层析 装置和操作系统 基本原理 1 加压柱色谱效果 Speed 分析型 制备型 Resolution Load 与Load相关的因素 柱径、柱长、粒度、填充剂密度 2 加压柱色谱目的 得到单体化合物 Lab. 一定纯度 生产规模 回收率 单位时间内分得的化合物量 洗脱液流速快 可用更细的颗粒，分辨率提高 避免不稳定化合物在开口柱上由于长时间暴露而导致分解（最大优点） 3 分类（Classifcaton） Analytical HPLC: μg － 5mg Prep. HPLC: 5 mg － 1 g Low-pressure LC: 10 mg － 1 g Medium-pressure LC: 100 mg －100 g 选择制备型系统需要考虑： 以上各法的极限（适应范围） 根据以上条件要求而选用的方法 上样量：质量超载（少量样品）or体积超载（多量样品） 柱尺寸，固定相粒度，压力，洗脱剂 经验积累 4 操作 TLC探索条件（色谱系统选择） 分析型小试 优化条件（超载） 套用优化条件（制备） 正式操作 获得纯品 分析鉴定纯品 再生柱：5倍柱体积 正相：actone—water—methanol—THF －dichloromethane 反相：water－methanol 5 Prep. LC的各种条件的应用情况及优化 （1）Column: loading, f, size, column efficiency, a, K’ number of theoretical plates, resolution （2）Stationary phase: 固—液、粒度大小 硅胶 －普通、键合相 AgNO3—coated silica gel－ 涂层AgNO3 分离萜类—分开不同双键数目或位置 Paired-ion Chromatogr.－ 生物碱 在柱上增加一种离子，该离子与欲分离物相反， 从而成为离子对，而成中性，易分离 Chiral stationary phase （3）装柱技术 加样法（Sample introduction） 加压泵（Pump） 检测器（Detectors） 流动相（Eluent） 分离样品收集 切割与再循环技术 二个成分色带太近，超出层析灵敏度范围，分不开时，采取的方法。（样品通过检测器不受破坏） 柱超载及中心切割法 要想得量多，需超载，要用中心切割法纯化，注意检测器峰值。 一、低压柱色谱 （Low-pressure LC） 1 简介 低压柱色谱可以用玻璃自制，现绝大多数是购买预制柱。 长度：从240 mm—440 mm 内径：从10 mm—37 mm 外径：从13 mm—42 mm L ID OD 进样量 A 240 10 13 0.3-1ml 0.2g B 310 25 28 1-5ml 1g C 440 37 42 2-10ml 3g 2 操作 填充剂：40-60μm，与TLC相同，流速快 加压：氮气瓶 约5bar 机械泵 展开 收集 二、中压柱色谱（Medium-pressure LC） 1 简介 载样量 1—100 g 流速 25-170 ml/min 填料粒度 25-200 μ m 最大压力 40 bar 2 操作 装柱 上样 洗脱 收集 三、制备型HPLC 1 简介 载样量 0.1-1 g 流速 30-100 ml/min 填料粒度 20-30μm 最大压力 70 bar 2 操作 装柱 上样 洗脱 收集 提取 基础 分离 白桦酸酯 合成（化学、生物转化） 第三讲 天然药物活性成分的提取与分离 重要性： －－天然药物的开发（WTO，知识产权） 柱 色 谱Column Chromatogrphy 常压柱色谱 0.1~50 g （Ordinary Column Chromatogr.） 吸附柱色谱 分