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桂花组织培养研究进展 摘要：桂花（Osmanthus fragrans Lour.）是木犀科（Oleaceae）木犀属植物，是我国传统十大名花之一。具有极强的观赏性，又有巨大的药用价值。通过桂花组织培养技术获得再生植株可以用于桂花的快速繁殖、辅助育种、种质资源保存、产生人工种子等。本文综述了桂花丛生芽的诱导、增殖与生根及愈伤组织的诱导与分化，并对今后桂花组织培养研究做了展望。 关键词：桂花；丛生芽；增殖；生根；分化 中图分类号：S68 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2014）12（c）-0000-00 桂花（Osmanthus fragrans Lour.）是木犀科（Oleaceae）木犀属植物，是我国传统十大名花之一。《本草纲目》记载“桂花生津，辟臭，治疗风虫牙痛。现代药理研究表明，桂花有降血糖、抗氧化、抗炎和抑菌作用。组织培养可用于植物的快速繁殖、辅助育种、种质资源保存、产生人工种子等[1]。我国桂花研究者通过腋芽、幼茎、胚、子叶等组织培养获得再生植株。本文总结了桂花组织培养的研究进展。 1 丛生芽的诱导、增殖与生根 1.1 初代培养 取材部位和时期决定了培养难易程度并影响培养结果。在桂花组织培养研究中，使用最多的外植体是嫩梢，因其带菌少，易消毒，操作简单。最早开展桂花离体培养的是秦新民[2]，他以MS作为基本培养基，激素组合为1.0 mg.L-1 6-BA（1.0mg.L-1 ZT）+ 0.05 mg.L-1NAA，诱导幼嫩茎段产生丛生芽[2]；王彩云实验结果表明NAA改为0.25 mg.L-1诱导率更高[3]；吕志鹏等通过正交实验认为MS+2. 5 mg.L-1 6-BA+ 0.5 mg.L-1NAA效果最好[4]；何钢等则认为1/2MS+ 0.5.mg.L-1 6-BA+ 0.2mg.L-1 NAA更有利于金狮桂幼茎丛生芽的诱导[5]；宋会访等则使用了LMc+KT 8.0mg L-1+NAA 0.1 mg L-1培养基[6]。桂花当年的生长期短，幼嫩茎段取材时间极为有限。为了延长桂花组织培养取材时间，袁王俊[1]、李林[7]等分别用休眠芽、萌动芽和幼嫩茎段为材料，系统研究了初代培养的条件，休眠芽以B5+7.0 mg?L-16-BA+0.05 mg ?L-1NAA，萌动芽以B5+5.0 g?L-16-BA +0.05 mg?L-1NAA，同时发现B5培养基相比于MS培养基产生的愈伤组织少，且生长速度快。蔡新玲等也认为桂花萌发芽由于经过低温休眠，芽体充分分化，营养物质积累丰富，苞片紧密，污染率低，且操作容易，是桂花组织培养很好的外植体[8]。 胚培养在杂交育种中可以进行胚拯救，缩短育种年限，具有重要意义。袁王俊等以B5+2 mg?L-16-BA+0.1mg ?L-1NAA为培养基，成功诱导桂花胚离体萌发[9]。马燕[10]、梁茂厂[11]等以大花金桂、籽银桂、籽丹桂幼胚为材料，结果与袁王俊等的研究基本一致。 1.2 继代培养 相对于初代培养，继代培养研究较少。宋会访等研究认为LMc+TDZ 0.5 mg L-1+0.10 mg L-1 NAA有利于增值[6]。袁王俊等发现，无论是休眠芽、萌动芽和幼嫩茎段，其萌发后继代培养最适合的培养基均为B5+2.0 mg?L-16-BA+0.05 mg?L-1NAA，而吕志鹏则认为B5+3.0 mg?L-16-BA+0.4 mg?L-1NAA效果最好[1]。 1.3生根培养 生根方面，研究者的结果比较一致，培养基为1/2MS（B5）+ 2-3mg.L-1 NAA+0-0.05mg.L-1 6-BA培养基。 2 愈伤组织的诱导、分化及胚状体的形成 彭尽晖等最先实现了桂花愈伤组织的诱导与增殖，以四季桂花梗作外植体，在MS+ 1.5 mg L-1 BA +0.1 mg L-12，4-D培养基上，暗处理7d，愈伤组织诱导率可达85.71%。用2，4-D 继代培养以MS+ 1.5 mg L-12ip+0.1 mg L-1NAA培养基效果最好[12、13]。同时发现继代培养中采用2，4-D作为生长激素，虽然生理活性强，诱导率高，但易使细胞老化，丧失生活力。王 珍华等[13]则以大花金桂的子叶为外殖体诱导产生愈伤组织，且愈伤组织在分化培养基1/2MS + 0.5mg.L-1TDZ+0.1 mg.L-1NAA培养基上产生不定芽，首次实现了桂花愈伤组织分化成苗。Zou 等[14]以下胚根、下胚轴、胚芽和子叶被作为外殖体，MS+1.0 mg.L-1 BA + 0.5 mg.L-1 2，4-D为培养基产生胚性愈伤组织，接着在MS+1.0 mg.L-1 BA and 0.5 mg.L-1 NAA培养基上产生了胚状体，第一次经由胚状体产生再生植株。 3 结论 桂花丛生芽的诱导、增殖与生根以及愈伤