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内生细菌YBS106菌株发酵条件优化① 　　摘 要：对一把伞南星内生细菌YBS106发酵条件进行研究，确定其最佳发酵液培养基配方和最佳发酵条件。通过杯碟法测定YBS106发酵液对棉花枯萎病原菌的抑菌作用，研究了该菌株在不同培养基，不同生长条件下的代谢产物活性。菌株YBS106的最佳生长条件为：pH7.0，28℃，发酵72 h，接种量4%，?床转速为200 r/min。在最佳培养条件下，该菌株对棉花枯萎病菌的抑菌率可达56%。 　　关键词：内生细菌 棉花枯萎病 发酵条件 抑菌 　　中图分类号：S476 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2014）02（c）-0140-02 　　Abstract：Study the fermentation conditions of a kind of endophytic bacteria YBS106 which was isolated from Arisaema erubescens in Emei Mount. to optimize the culture medium ingredients and the fermentation conditions. Use cylinder plate method to determine the antifungal activity of YBS106 fermenting solution against Fusarium oxysporum. It was shown that the optimal culture conditions were：medium initial pH 6.0， temperature 28℃， the inoculation 4%， cultivation time 72 h with 200 r/min rotating speed. Under the optimum fermenting solution and culture conditions， the inhibition ratio of YBS106 fermenting solution against F. oxysporum can reach to 56%. 　　KeyWords：Endophytic Bacteria；Fusarium Oxysporum；Fermentation Condition；Bacteriostasis 　　棉花枯萎病（Fusarium oxysporum）是一种由棉花尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporium f. sp. vasinfectum）引起的、具有毁灭性的土传棉花病害，在外界环境条件有利于枯萎病发生的情况下可引起棉花大幅度减产[1]。通过生物防治方法减少或抑制土壤中病菌接种体数量或致病活性，在小麦全蚀病等土传病害防治中已有成功报道[2]。利用生防措施来控制棉花枯萎病为广大科研工作者所期望，但目前为止尚缺乏高效稳定的生防菌株。内生细菌是一类生长在植物组织细胞间隙的微生物，其中部分内生菌能够产生与宿主相关的活性成分，是生防微生物的重要来源。 　　本课题组从一把伞南星（Arisaema erubescens （Wall.） Schott）组织中分离到一株对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant staphylococcus aureus， MRSA）和F. oxysporium具有高拮抗活性的内生细菌YBS106，同时也能诱导棉花产生系统抗性。 　　对微生物发酵工艺的优化主要包括初始条件的选择，培养基的组成配比及培养条件的优化几个方面[3]。本研究旨在对棉花枯萎病菌有拮抗作用的内生细菌YBS106的发酵工艺条件进行优化，以期为棉花枯萎病的防治提供新的方法和途径。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　S. marcescens YBS106由本课题组从A. erubescen中分离获得，棉花枯萎病致病菌（F. oxysporum）从感病棉花植株中分离获得。 　　1.2 培养基 　　营养琼脂培养基NA、营养肉汤培养基NB、马铃薯葡萄糖培养基PDA和葡萄糖铵盐培养基配方参考《植病研究法》[4]。 　　1.3 菌种培养方法及拮抗活性测定 　　拮抗细菌的发酵培养：先将保存在斜面上的菌种接入NA培养基平板表面进行活化，然后将其接入到装有100 ml作为种子培养基的500 ml三角瓶中，在30℃、转速为180 r/min条件下培养72 h，再将然后将种子液按1%的接种量转接到10个装有100 mlNB培养基的500 ml三角瓶中，以200 r/min的转速振荡培养72 h。 　　病原菌平板的制备：用打