石蜡切片步骤及注意事项-1.doc

石蜡切片步骤及注意事项——简易流程 取材和固定 1.组织块厚度约为0.2-0.3cm，以不超过0.5cm为宜。 2.固定液的量一般应为组织块总体积的4-5倍，也可达15-20倍。 3.固定时间为数小时至２４小时（需视组织块的大小而定）。 脱水和透明 ８０％酒精（min） ９５％酒精Ⅰ、Ⅱ（min） 无水酒精Ⅰ、Ⅱ（min） 二甲苯Ⅰ、Ⅱ（min） 2mm 45-60 45-60 45-60 15-30 2-4mm 60-120 60-120 60-120 30 4-5mm 120-240 120-240 120-240 60 浸蜡和包埋 1. 一般总的浸蜡时间为２－４小时左右 切 片 1.室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。在夏季时可用冰块冷却刀和组织块，减少刀与组织块在过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。 2.切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放入展片仪水盒内（一般水温为45℃左右）。待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。 3. 切片时要及时清洁刀口、除去蜡屑，否则易引起破碎。 4. 切片时摇动旋转轮动速度不可过快，用力应均匀，平稳，以40-60r/min为宜。 贴 片 待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中以毛面轻靠切片，并用毛笔将切片一边拨于玻片上，随即将玻片直立提起。快！ 烘片与脱蜡 石蜡切片在90度烘箱内烘半小时。 经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5-10min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min。 染色（HE）苏木精液中５－１０min→水洗→1%盐酸乙醇液约数秒至数十秒钟→水洗→伊红酒精溶液中染色２－５min→水洗