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微生物培训 集团质量管理部 孙英丽 2010年11月3日 主要内容 金黄色葡萄球菌的检测 沙门氏菌的检测 志贺氏菌的检测 单核细胞增生李斯特氏菌的检测 金黄色葡萄球菌的检测 金黄色葡萄球菌 Staphyloccocus aureus Rosenbach 是人类的一种重要病原菌，隶属于微球菌科葡萄球菌属 （Staphylococcus），可引起皮肤炎症及产生毒素。 金黄色葡萄球菌的检测 形态与染色： 典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、无鞭毛，无荚膜，革兰氏染色阳性。 金黄色葡萄球菌的检测 培养特性： 　　金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。耐盐性强，可在10-15%氯化钠培养基中生长。 金黄色葡萄球菌的检测 致病性： 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。其产生的肠毒素可引起食物中毒，呕吐和腹泻。 金黄色葡萄球菌的检测 抵抗力： 金黄色葡萄球菌80℃加热30min能被杀死。其产生的肠毒素100 ℃加热30min不被破坏。要使其完全破坏需煮沸2h。 金黄色葡萄球菌的检测 检验流程 金黄色葡萄球菌的检测 增菌：耐盐性强 （金黄色葡萄球菌适宜生长的盐浓度为5-7.5%） —— 7.5%氯化钠肉汤：呈混浊生长； ——10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤：呈混浊生长。 金黄色葡萄球菌的检测 分离： ——血平板 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h ——Baird-Parker 平板（卵黄亚碲酸钾、胰蛋白胨 、牛肉膏、 酵母膏 、丙酮酸钠 、甘氨酸 、氯化锂 LiCl·6H2O 、琼脂 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。 金黄色葡萄球菌的检测 Baird-Parker平板： §菌落直径为2mm～3mm ； §颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈； §用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明圈； §长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥； 金黄色葡萄球菌的检测 金黄色葡萄球菌的检测 血平板： §菌落较大，圆形，光滑凸起 ，湿润； §颜色呈金黄色，有时呈白色； §菌落周围有透明溶血圈； §有些菌需要经过再次传代后才有透明溶血圈。 金黄色葡萄球菌的检测 金黄色葡萄球菌的检测 涂片染色 金黄色葡萄球菌的检测 冻干血浆（北京陆桥） 每支安瓿管中加0.5ml灭菌生理盐水置完全溶解，然后加入0.3ml待检液，于37℃培养，在6h内定时观察凝血情况。 沙门氏菌的检测 沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙门氏菌有2500多个血清型和变种。 沙门氏菌的检测 不分解乳糖，大部分菌株产H2S，发酵葡萄糖产酸不产气。 最适培养温度为37℃，最适pH 7.2～7.6。 耐受胆盐，在粪便、土壤、食品、水中可生存5个月至二年之久。 沙门氏菌的检测 致病性 伤寒、非伤寒型沙门氏菌败血症和沙门氏菌胃肠炎等。 最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。 沙门氏菌的检测 检验流程 沙门氏菌的检测 前增菌 目的：修复受损的细胞。 注：样品处理冷饮产 品应在45℃以下不超过 15min，或2~5℃不 超过18h解冻。 沙门氏菌的检测 沙门氏菌的检测 选择性增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培养18 ～24 h。 沙门氏菌的检测 沙门氏菌的检测 分离 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板 或40～48 h BS琼脂平板 ，观察各个平板上生长的菌落。 注：为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用两种以上选择性分离培养基。 沙门氏菌的检测 沙门氏菌的检测 沙门氏菌的检测 沙门氏菌的检测 沙门显色培养基按照显色培养基的说明进行判定。 沙门氏菌的检测 生化鉴定 自选择性琼脂平板（至少2种选择性平板）上直接挑取2个以上可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂 TSI 。 TSI的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亚铁铵、硫代硫酸钠、酚红、琼脂。 在TSI琼