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第六章 酶的非水相催化(2)Nonaqueous Enzymology(2) 第一节 酶非水相催化的研究概述 第二节 有机介质中水和有机溶剂对酶催化反应的影响 第三节 酶在有机介质中的催化特性 第四节 有机介质中酶催化反应的条件及其控制 第五节 有机介质中酶促反应应用举例 第四节 有机介质中酶催化反应的条件及其控制 一、有机介质中酶催化反应的类型 二、酶的选择 三、底物的选择和浓度控制 四、有机溶剂的选择 五、水含量的控制 六、温度的控制 七、pH值的控制 脂肪酶（Lipase, EC3.1.1.3,甘油酯水解酶），全称为三酰基甘油酰基水解酶（Triacylglycerol acylhydrolase），它们是一类特殊的酯键水解酶，主要水解由甘油和水不溶性长链脂肪酸形成的甘油三酯。脂肪酶的另一个重要特征是它们只能在两相界面-油（或脂）水界面上起作用，对均匀分散的或水溶性底物不起作用，即使有作用也很缓慢 一、有机介质中酶催化反应的类型 １合成反应 酯化反应（脂肪酶）, 有机酸和醇进行酯类的合成反应. ２转移反应（酯转化反应） 合成功能性酯类 ３醇解反应 ４氨解反应 脂肪酶在叔丁醇介质中外消旋苯丙氨酸甲酯进行不对称氨解，合成R-苯丙氨酰胺 蛋白酶催化的氨基酸合成反应，两者都生成生成水 5 氧化还原反应 二 酶的选择 1、 酶种类的选择：脂肪酶、蛋白酶、次黄嘌呤氧化酶、过氧化氢酶，过氧化物酶等。 各种酶的来源多样,性质不同. 产脂肪酶的微生物有65个属，其中细菌28个属，放线菌有4个属，酵母菌有10个属，其他真菌有23个属 酶种类及来源的选择 根据催化反应的类型 应具有对有机介质变性的潜在能力，在有机介质中能保持其催化活性构象。 除与酶有关，还与酶-底物、产物-溶剂间关系有关。 2．酶形式的选择 （1）酶粉(冻干粉)： 容易聚集成团, 影响催化效率.( 注意底物、水、酶等的加入顺序) 冻干过程中容易活性降低，加入稳定剂。 二．酶的选择 （２） 化学修饰酶： 改善酶的耐有机溶剂的能力或其它特性。 例如：SOD酶经糖脂修饰后变成脂溶性，它对温度、pH、蛋白酶水解的稳定性均高于天然SOD。 二．酶的选择 （３） 固定化酶(有机相催化中，吸附法制备的固定化酶优势明显)： 把酶吸附在不溶性载体上（如硅胶、硅藻土、玻璃珠等）制成固定化酶，其对抗有机介质变性的能力、反应速度、热稳定性等都可提高。 有机相中固定化后载体对酶的影响 A.载体能通过分配效应剧烈地改变酶微环境中底物和产物的局部浓度。 例：在水溶液中，底物肉桂酸浓度在0.1mmol/L 以上可强烈抑制马肝酸脱氢酶，但在乙酸丁酯中使用亲水载体固定化酶，底物浓度高达50mmol/L 也不会发生抑制作用。 产物抑制 B.载体影响酶分子上的结合水 通过选择合适的载体可使体系中的水进行有利分配。 C.通过载体与酶之间形成的多点结合作用，可稳定酶的催化活性构象。 例：α-胰凝乳蛋白酶与聚丙烯酰胺凝胶共价结合后，在乙醇中的稳定性明显提高，并且对有机溶剂的抗性随酶与载体间共价键数量的增加而增强。 D.酶动力学影响一个酶同时催化的两个反应的相对速度。 例 在低水活度下把胰凝乳蛋白酶固定在聚酰胺载体上，水解反应被抑制却有利于醇解反应。 三、底物的选择和浓度控制 根据酶的专一性来选择底物. 底物浓度对酶催化反应速度有显著影响。 酶在有机介质中进行催化，要考虑底物在有机溶剂和必需水层中的分配情况。 疏水性强底物有机溶剂中溶解度大，浓度高，但难于通过酶表面的必需水层，酶分子活性中心结合的底物较低。酶的催化速度可能受到影响。 而亲水性强的底物，有机溶剂中的浓度低，酶分子活性中心结合的底物也不可能高。 底物浓度太高，可能对反应还有抑制作用。 四、有机溶剂的选择 水溶性有机溶剂：甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、甘油、丙酮、乙晴等（亲水性溶剂，log P？） 水不溶性的有：石油醚、己烷、庚烷、苯、甲苯、四氯化碳、氯仿、乙醚、戊醚等（疏水性溶剂，log P？ ） 极性过强（lgP2）溶剂，会夺取较多的酶分子表面结合水，影响酶分子的活性，而且使疏水性底物的溶解度降低，降低酶反应速度。 极性过弱（lgP5）的溶剂，虽然对酶分子必需水的夺取较少，疏水性底物溶解度高，但底物难以进入酶分子的水分子层。 （5lgP2）溶剂用的相对较多．但要考虑底物，产物的溶解度． 3．选择有机溶剂必须考虑因素 (1). 有机溶剂与反应的匹配性（即相容性）（包括反应底物、产物与溶剂的匹配性，极性产物倾向于保留在酶附近，可能引起产物抑制或不必要的副反应发生。) 相容性 例：对于酶促糖改性而言，使用疏水性的，与水不互溶的溶剂是不现实的，因为不溶性底物和不溶性的酶之间无相互作用，必须用亲水性的溶剂（