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实验二 培养过程中的显微观察与应用
一、实验目的1.练习显微镜的使用方法。2.掌握酵母菌形态观察的基本方法,并学习描述不同生长阶段的酵母菌的形态特征。3.学习用血球计数法估算酵母菌的数量。4.根据酵母菌细胞形态的不同,计算出芽率5.学习用染色法估算酵母菌的存活率。6.学习用计算机软件测量微生物大小。二实验原理1.显微镜的结构及工作原理。2.血球计数法的原理 血球计数板是一块特制的载玻片,上面有四条平行槽将载玻片分为三个平台,中间的平台较宽,其中间又被一短槽隔成两半,每边平台上各有一个含九个大格的方格网,中间大格为计数室。实验所用的计数室的规格是*16型,称为麦氏血细胞计数板,有个中方格,每个中方格分为个小方格。应用血球计数板在显微镜下直接计算微生物细胞的数量,方法是先测定若干个中方格中的微生物细胞数量,再换算成每毫升菌液中微生物细胞数量。计数个中方格内细菌数,设为A,菌液的稀释度为B,则菌液浓度=(A/)**10*1000*B(个/毫升)。3.出芽的酵母菌细胞呈葫芦状。
4.微生物细胞大小的测定。计算机软件的调用可直接测定微生物细胞的大小,根据细胞放大倍数可算出细胞的实际大小,还可以直接导出生成表格。5.通过染色后观察细胞形态确定细胞是否存活。三实验材料显微镜血球计数板培养时间分别为2448h 72h的酵母菌载玻片盖玻片酒精蒸馏水镊子擦镜纸四实验内容1.将显微镜置于实验台上利于观察的位置;调节光的亮度,将显微镜的光源打开,调节旋钮至适当亮度;打开计算机。2.调至10*倍镜,上升镜筒至最好处,将血球计数板放在载物台上,夹好。3.移动血球计数板到物镜下方,调节粗准焦螺旋使物镜下降,至出现方格,调节细准焦螺旋至物像清晰,移动血球计数板,把要观察的位置移到视野中间,调至40*镜,调节细准焦螺旋至物像清晰。
4.将血球计数板用酒精清洗干净,取出一个盖玻片擦拭干净,将盖玻片放在血球计数板方格上,将配置好的酵母菌稀释液滴到血球计数板上,用显微镜分别观察四个中方格中细胞总数目和葫芦状细胞数目并采集图像,计数,将血球计数板取出并洗干净。5.取干净的载玻片和盖玻片,制作酵母菌装片并染色,在显微镜下观察,采集图像并估算细胞死亡率。6.取出采集好的图片,调用计算机软件,测量细胞大小并用表格记录7.清理实验台。五实验结果
序号 长度 P/F L1 18.36 Pass L2 19.28 Pass L3 20.24 Pass L4 21.27 Pass L5 22.18 Pass L6 24.03 Pass L7 24.18 Pass L8 24.20 Pass L9 24.32 Pass L10 24.69 Pass L11 25.81 Pass L12 25.99 Pass L13 27.76 Pass L14 29.15 Pass L15 29.72 Pass L16 29.96 Pass L17 29.96 Pass L18 30.45 Pass L19 31.14 Pass L20 34.98 Pass L21 35.35 Pass L22 35.68 Pass L23 37.94 Pass L24 46.51 Pass 求宽 23.45250 求和 34.24136 2)48h
48h 稀释10倍 6+5+3+4+4=22个
细胞浓度=22/5*25*10*1000*10/mL
序号 长度 P/F L1 11.75 Pass L2 13.67 Pass L3 14.38 Pass L4 16.13 Pass L5 17.15 Pass L6 19.38 Pass L7 19.53 Pass L8 19.53 Pass L9 19.57 Pass L10 19.58 Pass L11 19.89 Pass L12 20.84 Pass L13 20.89 Pass L14 21.44 Pass L15 22.14 Pass L16 23.44 Pass L17 23.48 Pass L18 23.97 Pass L19 24.73 Pass L20 24.74 Pass L21 25.54 Pass L22 26.45 Pass L23 26.67 Pass L24 27.58 Pass 求宽 18.30333 求和 23.66126 3)72h
稀释10倍 7+5+7+5+3=27个
细胞浓度=27/5*25*10*1000*10/mL
序号 尺寸 P/F L1 1.03 Pass L2 1.14 Pass L3 1.24 Pass L4 1.24
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