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第三章 植物组织培养的培养条件 第一节 植物组织培养的条件 一、环境条件 （一）温度 培养温度对植物细胞生长及二次代谢产物生成有重要影响。通常，植物细胞培养采用25℃。 1．离体培养条件下的温度控制原则 温度控制主要依据植物种的起源和生态类型来确定。将植物分为喜温性植物和冷凉性植物两大类。喜温性植物培养温度一般控制在26~28℃比较适宜。冷凉性植物通常培养温度控制在18~22℃或＜25℃较为适宜。 一般温度低于15℃，高于35℃对植物细胞的分裂、分化不利。在细胞脱分化阶段（诱导期）和愈伤组织增殖期（分裂期），温度要求高一些，而在器官发生阶段（分化期）要求低些。 2．培养周期中的昼夜温差 培养过程中采用恒温培养好，还是变温培养好呢？目前多数植物种，从器官到细胞培养均采用恒温培养。国内有关小麦、水稻花药培养温度试验报道认为：在诱导花药形成愈伤组织时，昼夜恒温较好，在器官分化时，昼夜具有一定温差比较好，分化出的小植株也健壮。 3．低温预处理 有报道，花药离体培养前，实行低温预处理，可以促进植物细胞脱分化和再分化，已成为一项有效的诱导措施。特别在花药和花粉培养方面的研究报道相当多。 （二）光照 光对植物有着特殊的作用。光照射条件不仅通过光照周期、光的质量 即种类、波长 而且通过光照量 光强度 的调节来影响植物细胞的生理特性和培养特性。研究表明，光调节着细胞中的关键酶的活性，有时光能大大促进代谢产物的生成，有时却起着阻害作用。 1．光照强度：离体培养条件下一般为1000~4000lx（勒克斯），离体培养中通常难以达到4000lx，一般光量在2000~3000 lx。 2．光质：不同的光质对植物的光合作用、色素形成、向光性、形态建成的诱导等影响是不同。橙红光和蓝紫光是生理有效辐射，绿光很少被叶绿素吸收，属于生理无效辐射。据报道，芽分化的有效光谱成分为蓝紫光，波长为419~540nm，波长为660nm的红光对芽分化无效。根分化则和芽分化相反，根分化受红光600~680nm所刺激，而蓝光则无效。 3．光照时间：离体培养是否需要光周期，应根据植物种类、培养目的来决定。 （1）愈伤组织诱导阶段，一般采用三种做法：全暗周期性光照、散射性光照。根据植物种类的不同做法不同：愈伤组织多数植物适合全暗或周期性光照，上述两种做法诱导频率差异不大。另一些植物差异较大，如石刁柏全暗诱导愈伤组织，要比周期性光照下好得多。大豆愈伤组织诱导采用散射光照比较好。 （2）器官发生阶段：一般给予周期性光照比较好。光周期长短应植物种类而异。多数植物在8~10h光照，14~16h黑暗为宜。 （三）湿度 组织培养中湿度的影响有两个方面，一是培养容器内的湿度条件，一是环境的湿度条件。容器内的湿度几乎是100%的相对湿度，二是环境的相对湿度一般要求70～80%。周围环境的相对湿度低于60%时，培养基容易干涸，培养基的干涸会改变培养基的渗透压。由于渗透压的改变必然会影响到培养组织、细胞的脱分化、分裂和再分化。相反周围环境相对湿度过高，培养室潮湿，具备各种细菌和霉菌的滋生条件，它们的芽孢和孢子侵入培养瓶，造成培养基和培养材料的污染。 （四）渗透压 培养基的渗透压是由培养基中各种物质的总浓度决定的。培养细胞是通过细胞渗透来吸取营养的，当培养材料和培养基之间处于等渗时，或者培养材料的渗透压略低于培养基渗透压时，培养材料才可能从培养基中吸取养分和水分。 1．渗透压调节物质 培养基各种物质中，糖对培养基渗透压起决定性作用。因此渗透压调节往往从调节糖浓度着手。，当然还可以用其他渗透压调节剂，如甘露醇、盐类等。 2．糖的种类和糖浓度，最多用蔗糖，也可以用葡萄糖和果糖。 （1）不同种植物细胞脱分化和再分化所需糖浓度不同，多数植物种适宜的糖浓度为2%~6%。 （2）培养目的不同要求糖浓度不同：诱导器官脱分化形成愈伤组织为3%~6%，愈伤组织芽分化为3%~6%，根分化为2%~3%。 （3）培养方式不同对糖浓度要求不同 棉花：器官培养3%蔗糖或葡萄糖。原生质体培养1%蔗糖、0.5%葡萄糖、11%甘露糖。 （五）pH值 植物组织和细胞在离体培养条件下，植物体内的酸碱度失去自行调节能力。因此在配制培养基时，应根据需要进行人工调节。植物细胞培养通常使用的pH值范围是5.5～6.5。pH在4.0以下或7.0以上培养物就不能正常生长。 （六）通气条件 无论是植物细胞培养还是动物细胞培养，容器空间中的O2及CO2用以保证细胞体内代谢活动的进行。通气是细胞液体深层培养重要的物理化学因子。好气培养系统的通气与混合及搅拌是相互关联的。对摇瓶试验，通常500m的三角瓶内装80200mL的植物细胞培养液较适宜。当然气液传质还与瓶塞的材料有关。试验表明，从溶氧速率考虑，以棉花塞最好，微孔硅橡胶塞次之，铝箔塞最差。 （一）培养基