在锌硫或二硫化合物的吸附结合交换下氧化态金属从金属蛋白上的脱离.docVIP

在锌硫或二硫化合物的吸附结合交换下氧化态金属从金属蛋白上的脱离 聚甲醛; 谷胱甘肽; 金属基团; 放射色谱法 生化生理科学医学中心,哈弗医学院,长木大街250号,波士顿,邮编02115 与伯特L.瓦特合作,1993年9月20日. 摘要:哺乳动物体内的金属蛋白已经被认为在细胞锌元素代谢过程中起了重要的作用.所有的7种金属原子都具有高热力学稳定性,可分成两组深深隐藏在细胞内。如果这些蛋白质在金属传递过程中起到重要作用，那么就必然有一种机理来解释金属的释放。其中一种方法来实现就是用适当的细胞配合基于金属硫因的相互作用，为了研究这样一个中间过程，我们设计了一个用放射性色谱技术的方法，能够探测到含有65Zn标记的Zn-金属硫因对其他生物分子的影响。利用这种方法，我们能确定兔子肝脏中随着金属蛋白-2与谷胱甘肽二硫化合物的结合对锌离子的释放，在假定动力学条件下，单一反应与谷胱甘肽二硫化合物的浓度成线性关系，从5到30毫摩尔每分钟以二级反应速率常数K=4.9×10-3S-1M-1L(PH=8.6,25℃),显然锌的解离并不直接与谷胱甘肽二硫化合物相联系，而是溶剂胶熔基锌硫醇盐在金属硫因的两方面[Robbins, A. H., McRee, D. E., Williamson, M.,Collett, S. A., Xuong, N. H., Furey, W. F., Wang, B. C. Stout, C. D. (1991) J. Mol. Biol. 221, 1269-1293]参与了硫醇或二硫化合物与谷胱甘肽二硫化合物之间的交换，这种发生在不能区分的两组速率上速率限制作用很低S-thiolation，然后引起金属离子的解离和脱落。这样一种解离机制要把控制金属包含它的金属硫因与细胞的谷胱甘肽氧化还原作用和加大生理学观测问题的提出和谷胱甘肽中锌金属蛋白的代谢和锌离子对其他生化分子自价值的研究。 锌蛋白酶的高稳定结构已经在锌离子的外部环境和一系列蛋白质功能中扮演的稳定的作用（1-3），而在生化方面的这些结构作用变得很明确，细胞却中锌离子代谢动力学知识却已经滞后和缺乏，因此既不更新也不加大力度对锌循环的了解，尽管金属硫蛋白长期被假定和认为参与了其中一个或全部的细胞内锌动态平衡过程（4-6）。 20种哺乳动物体内的60种氨基酸是半胱氨酸，它们的侧健仅与7个锌原子配合。那些位于分开域的金属可归纳成两组独特的类别。一类是，用6个端位和3个半胱氨酸硫原子桥健相连了3个锌原子；而另一类，其他4个原子则是用相同数目的半胱氨酸配合体端位连接，而不是5个半胱氨酸硫原子桥健连接。尽管两类都具有高位定性[KD (Zn) = 5×10-12 M; pH 7.4 (9)]，它们能显著的反应。In vitro，各组，内部或相互之间经过分子交换反应（10），它们参与分子内反应---要么是MT异构重组之间金属交换（11），或者是金属从MT转移到the apoforms 金属蛋白（12）---那些发生在配合体交换过程中，包括分子在反应时的平衡。大概，那么反应将会限制部分高分子与那些MT能特别的、不应该认为明显是一种通用的机制对从ＭＴ上转移金属离子。In vivo，锌元素是很容易被其它生物分子利用的元素，因此，在正常状态下缺乏锌元素，那么锌就会从ＭＴ上解离下来，以0.6毫摩尔每小时的固定速率。而金属解离的分子机理还不清楚，它并不受MT蛋白水解的控制，since this is at least one order of magnitude slower (13)，这些观测数据表明MT像动力学不稳定的高分子储锌池，并引出了一个想法，MT在细胞内重新分配锌离子过程中扮演了重要的角色。 有关金属从MT上解离的化学和生物方面的机理知识是重要的，脱离实际而想出的金属蛋白在锌分配上的作用 （missing links in the chain ofevents marking such a role of MT in zinc istribution.）。除了在细胞溶酶体的酸性环境，细胞游离锌从MT上解离下来没有生理上的PH变化，同样，因为MT只有非常少的二级结构，它是很难改变结构构像的，就像很难改变分子中金属结合力。蛋白质高度紧奏的结构和它的分组加上缺少生理感受器的分子复杂的实现解离机制。 研究哪些影响金属解离的机理，我们应用了一种放射性色谱技术，来把MT从潜在的反应物和检测它的金属混合物中分离。应用这种技术，我们已经找到二硫代物使Zn从65Zn-labeled MT上解离，在此，我们阐述了谷胱甘肽二硫化合物促使金属解离的动力学过程，大多数富二硫化合物存在于细胞内，并且讨论了隐含的氧化性反应来调控MT。 材料和方法 材料:由H.R.Hagi（瑞士苏黎世大学）提供了纯