真菌作业指导.docVIP

? 目的：? 通过无菌检验建立起产品无菌的直接数据，以评估灭菌效果是否符合要求。 ?2、适用范围：? 适用于所有经过灭菌后的产品的检查。 ?3、作业条件：? 3．1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。? 3．2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。 ?4、作业方法与步骤? 4．1制作或选择培养基（参见《培养基制作作业指导书》） ?4．1．1好氧——厌氧菌检测时用硫乙醇酸盐按一定比例制作； ?4．1．2真菌检测时用改良马丁培养基按一定比例制作。? 4．1．3培养基需按要求培养16-18H后，检查无菌生长方可使用。 ?4．2制作阳性对照? 4．2．1好氧——厌氧菌检测时用枯草芽孢杆菌制作；? 4．2．2真菌检测时用自然界分离的霉菌制作。? 4．2．3取对照用菌一环用0.9%无菌生理盐水按1:1000?稀释，制成对照供试液。? 4．2．4取1ml对照供试液加入到一个装有15ml培养基试管中，作成阳性对照管，进行培养。 ?4．3制作产品供试液? 4．3．1取待测试产品1~2PCS，根据产品物性的大小，分别采用直接浸入法或棉拭子擦洗法或冲洗法收集洗脱液，装在相应的容器中。 ?4．4制作培养用试管? 4．4．1取1ml产品供试液，加入到装好10~15ml培养基的试管中，按同样的方法共制作十个试管进行培养； ?4．5培养与判定? 4．5．1将上述两种制备完成的试管放在恒温箱中进行培养。? 4．5．2需气菌、厌气菌培养温度30～35℃、真菌培养温度20～25℃，培养14日。? 4．5．3在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。阳性对照管在24小时内应有菌生长，否则为本检测无效；? 4．5．4经过培养后，若出现浑浊，可以外观判断有明显长菌的可以判定有菌，若不能明显判定的，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片，染色，用显微镜观察是否有菌。? 4．6将整个过程进行记录并形成报表 无菌检验作业指导书? 1目的? 通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。? 2?适用范围? 适用于灭菌后医疗器械产品电凝镊的无菌检验。 ?3?检验依据? 3.1、产品注册标准? 3.2、《中国药典》（2010年版）? 3.3、GB14233.2-2005?医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法? 3.4、GB15980-1995?一次性使用医疗用品卫生标准? 4?仪器、设备? 百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、PH计、冰箱、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。 无菌检验室的环境要求? 5.1?无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。? 5.2?缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。? 5.3?无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。? 5.4?无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1cfu/平板。 ?6?无菌检验前的准备?6.1?器具灭菌、消毒? 6.1.1?灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。可经电热干燥箱160℃以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。? 6.1.2?消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。? 6.1.3?标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。? 6.2?人员、物料进入无菌检验室? 6.2.1?开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。? 6.2.2?物料进入无菌检验室流程? 6.2.2.1?脱包：进入无菌检验室的物品若有双重包装的，需将外包装在传递窗/缓冲间拆除后，传入试验室。? 6.2.2.2?消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理，以避免将外包装污染的微生物带入无