分子生物学复习结L.docVIP

第一章 绪论 1、分子生物学（P1）：从分子水平研究生物大分子的结构与功能从而阐明生命现象本质的科学 ，主要指遗传信息的传递（复制）、保持（损伤和修复）、基因的表达（转录和翻译）与调控。 决定双螺旋结构状态的因素 氢键：GC之间有三条氢键，AT之间有两条氢键，这是DNA双螺旋结构的重要特征之一，DNA的许多物理性质如变性、复性以及Tm值等都与此有关。加入尿素或甲酰胺等可以使Tm值显著降低。 碱基堆集力：DNA同一条链相邻碱基之间的非特异性作用力，包括疏水作用力和van der Waal力。疏水作用力使DNA相邻的碱基有相互堆集在一起的趋势，这是形成碱基堆集力的重要因素之一。DNA双链中存在大量的嘌呤环和嘧啶环，其累积的van der Waal力是相当可观的，这是形成碱基堆集力的另一个重要因素。 氢键与碱基堆集力的协同作用：已经堆集的碱基更容易发生氢键的键合，相应地已经被氢键定向的碱基更容易堆集。两种作用力相互协同，形成一种非常稳定的结构。如果一种作用力被消除，另一种作用力也大为减弱。 带负电荷的磷酸基的静电斥力： DNA溶液中的离子浓度降低时，阳离子在磷酸基周围形成的屏蔽作用减弱，使得磷酸基的静电斥力增大，因而Tm值随之降低。所以纯蒸馏水中的DNA在室温下就会变性。 碱基分子内能：温度升高，碱基分子内能增加时，碱基的定向排列遭受破坏，消弱了碱基的氢键结合力和碱基的堆集力，会使DNA的双螺旋结构受到破坏。 总之，氢键和碱基堆集力有利于DNA维持双螺旋结构，而静电斥力和碱基分子内能则不利于DNA维持双螺旋结构。 4、 DNA聚合酶Ⅰ的功能 （1）、5’-3’聚合功能。主要用于DNA的修复和RNA引物的替换； （2）、3’－5’ 外切核酸酶活性： 校对功能(proofreading)； （3）、5’－3’外切核酸酶活性。A、切口平移 b、链的置换 c、模板转换 （4）、内切酶活性 肠杆菌DNA聚合酶 I、II、 III 的性质比较 性质 聚合酶 I 聚合酶II 聚合酶III 3’－5’ + — — 新生链的合成 — — + 生物学活性 1 0.05 15 生物学功能 切除引物修复DNA 修复DNA 修复 DNA Pol I：具有DNA聚合酶活性，需要模板和引物，只有当引物具有游离的3`-OH时才能将四种核苷酸根据模板的信息合成DNA。其功能主要用于复制后的校正。外切酶活性在先，聚合酶活性在后。 1）? 5`→3外切核酸酶活性，特点：Pol I只在核酸有5`磷酸末端存在时才发挥这种活性；切除的核苷酸是已经配对的，以逐个逐个的方式切除；被切除的核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸，也可以是核糖核苷酸。 2）? 3`→5`核酸外切酶活性：由具有游离的-OH的未配对3`末端核苷酸激活，即对不配对的碱基造成的单链进行识别。 3）? 5`-→3`方向的聚合酶活性 4）? 核酸内切酶活性：当一段DNA带有5`-P的不配对单链时，Pol I可以作用于此单链相连的两个配对碱基之间，切断其磷酸二酯链。 5）? Klenow以枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶处理时，Pol I裂解为大小不同的两个活性片段，较大的C端片段具有聚合酶和3`→5`核酸外切酶活力，称Klenow片段，较小的N端片段，具有5`→3`方向核酸外切酶的、活力。 Pol III：是大肠杆菌中的主要复制酶，分子量最大，由7个亚基αεθτγδβ各二个组成全酶，其中αεθ构成核心酶。 α：5`→3`聚合功能 ε：3`→5`外切活性 θ：连接核心酶 τ：使核心酶与模板结合 其他亚基的功能虽然还不很清楚，但它们的参与提高了反应的持续性 DNApol Ⅱ和DNApol Ⅲ的共同功能： 多亚基酶；5’-3’聚合活性；3’-5’的外切核酸酶活性；DNApol Ⅱ在体内功能尚不清楚，可能参与DNA修复 5、螺旋酶（helicase）?又称解旋酶：是促进DNA的两条链分离的一类酶。 6、拓扑异构酶（Top）（旋转酶）：一类改变DNA的超螺旋状态的酶。 7、 第六章 DNA的损伤、修复和基因突变 1、DNA损伤：在生物体生命过程中DNA双螺旋结构发生的任何改变。 （1）包括：1）单个碱基的改变——通过序列的变化改变子代遗传信息；2）双螺旋结构的异常扭曲——对DNA复制或转录产生生理性伤害 （2）产生因素：自发性损伤、代谢物质、物理、化学因素引起的损伤 1）自发性损伤 　　互变异构移位：碱基发生烯酮式—酮式结构互变；脱氨基作用： A C G 脱氨基 A→I C→U；DNA聚合酶的“打滑”：引起一个或数个碱基的插入或缺失；活性氧引起的诱变： H2O2对DNA造成氧化损伤；碱基缺失：自发性水解 2）物理因素引起的损伤： （1）紫