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园林植物快繁技术 说 明 ?试题题型与题量 ?比较题： 5个小题，每小题6分，共30分。 ?简述题： 5个小题，每小题8分，共40分。 ?论述题： 2个小题，每小题15分，共30分。 ?考试范围 ?全书 ?其他问题 ?考试时间2小时 ?满分为100，及格分为60分 ?考试时无需带工具 绪 论 1、植物离体培养 是指通过无菌操作，使植物体的各类结构材料(外植体)，接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下，进行离体培养的一套技术与方法，通常称之为植物组织培养或植物的细胞与组织培养。 2、离体培养技术体系 ?胚胎培养及以胚胎为基础的培养技术 ?器官及器官原基培养 ?组织培养 ?细胞培养 ?原生质体培养及以原生质体为基础的培养技术 第一章 离体培养的基本操作方法 1、外植体 植物离体培养中的各种接种材料。包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。 2、外植体的选择 ?选择优良的种质 ?选择健壮的植株 ?选择外植体的大小 ?选取外植体的时期 ?选择细胞培养材料 3、培养材料的处理 ?母株的预处理 ?外植体休眠期的处理 ?外植体的灭菌 4、培养基 外植体生长的营养物质，通常有两个水平，一是基本培养基，包括大量元素和微量元素、维生素和氨基酸，还有糖和水。二是完全培养基，即在基本培养基的基础上，附加各种植物生长调节剂以及其它的复杂有机附加物。 5、固体培养基和液体培养基的比较 ?固体培养基 ?设备简单，使用方便 ?不能充分利用培养容器中的养分 ?易造成自我毒害 ?液体培养基 ?需要一定的的设备 ?有利于外植体的生长 ?避免上述固体培养基的缺点 6、无菌室 ?无菌室的要求 ?无菌室的灭菌 7、试材和器具的灭菌 ?培养基的灭菌 ?特殊药品的灭菌 ?器皿(具)灭菌 ?外植体的灭菌 8、无菌操作 ?无菌操作前10min先使超净工作台处于工作状态。 ?穿戴好工作衣帽后，用70％酒精擦拭双手和工作台面，操作期间也应再擦拭数次。 ?拔塞前，要用火焰灼烧瓶口。用硫酸纸等做瓶盖的，应在火焰附近打开盖子。 ?操作时，试管口应略略向下，避免尘埃杂菌落入管内，又便于操作。 第二章 胚胎培养和离体受精 1、胚培养的意义 ?促使发育不良或中途败育的胚发育成熟 ?打破休眠期促进胚萌发 ?克服多胚品种珠心胚的干扰 ?快速繁殖良种砧木 ?诱导胚性愈伤组织 2、成熟胚的培养 ?材料的消毒与接种 ?培养基 ?种胚培养的外界条件 3、原胚培养 ?基本培养基 ?生长凋节剂及其它附加物的影响 4、离体受精 也称离体授粉或试管受精，它是把未授粉的胚珠或子房从母体上切离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌的花粉，使之在试管内受精，应用这种技术，可以使花粉不经柱头和花柱组织，直接进入子房中的胚珠，有可能克服所谓孢子体型的不亲合，从而得到远缘杂种。 第三章 器官和组织培养 1、器官培养 是指植物某一器官的全部或部分或器官原基的培养，包括茎段、茎尖、叶片、子叶、花序、果实、种子等等。 2、组织培养 ?广义：包括各种类型外植体的培养，亦即离体培养。 ?狭义：包括形成层组织、分生组织、表皮组织、薄壁组织和各种器官组织，以及其培养产生的愈伤组织的培养。 3、茎尖培养 其含义较广，包括小的仅10—100um的茎尖分生组织，大的几十毫米的茎尖或更大的芽的培养，前者主要用于无病毒苗的培养，后者用于无性系快速繁殖。 4、花药培养 5、花粉培养 第四章 细胞培养 1、成批培养 是把细胞接种到一个与外界隔绝的只允许气体和挥发性的代谢物质交换的，营养液体体积保持不变的密闭系统中培养。 2、连续培养 是用一定容积的但非密闭的反应器来进行的，在培养过程中不断注入新鲜培养基，而使其营养物质连续得到补充，细胞的生长和增殖连续进行。它可分为开放式连续培养和封闭式连续培养。 3、固相化细胞 把细胞固定在一种堕性基质，如琼脂、藻酸盐、纤维或膜上面或里面，细胞不能运动，而营养液可以在细胞间流动，供应其营养。 4、单细胞培养 也称单细胞克隆技术，它不是指培养的只有单个细胞，而是指接种的细胞群体中，不存在悬浮培养中所可能存在的小细胞团，而是纯粹的单细胞。各单离细胞不仅仅只留在增殖阶段，它可被诱导再分化，形成完整植株。 第五章 原生质培养与融合 1、游离原生质体的一般技术程序 ?植物材料称重约0．5g，常规方法灭菌、无菌水冲洗5遍，在无菌条件下把其搞碎，称重后放入中6cm的培养皿，搞碎。 ?把预先配制好的5ml酶混合液经孔径为0.2um的过滤器过滤入培养皿。 ?用石蜡封住培养皿后，放在转速为30转／min、25—30 ℃ ，微光或黑暗条件下保育几小时或过夜。 ?用倒置显微镜检查原生质体游离效果，确定保育