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调制纳米级的壳聚糖对质粒DNA通过鳃粘膜优化的理化性能鳃黏膜是一种管理的DNA疫苗对鱼类和其他水生生物的便捷途径。 已交付审议，但是，一个合适的表述是必需的。要制定一个合适的载体，我们利用离子凝胶和微乳液（率μe）合成壳聚糖纳米颗粒包埋在质粒DNA / P比1:1和2.5:1。对于纳米粒子的性质，规模，形态，zetapotential，和红外光谱进行了测定。包封追求效率的质粒DNA，建立了凝胶阻滞分析。在调查基础上，通过率μe法合成纳米粒子似乎已经通过这条路线为有效地提供所要求的特性。关键词：壳聚糖纳米粒;鳃黏膜;微乳液;离子凝胶化; DNA疫苗。DNA疫苗的通过鱼鳃黏膜一直被视为免疫鱼苗以及成鱼的重要手段。不同方法已被使用或正在研究的，但是，有效实用的系统还没有发展。虽然载体介导的已经实现，粒子的特性是需要优化，以防止已经由以前的研究者们观察到的毒性作用。阳离子聚合物，尤其是壳聚糖，细胞的相互作用和膜粘附重要作用。 此外，为有效的基因转染提供了最佳水平。壳聚糖在多种细胞类型有效的转染能力在以前的研究中，DNA的壳聚糖纳米粒子的报告体现缺氧相关毒性。充电后经过进一步的DNA中和络合，毒性显着降低。调查有关壳聚糖纳米粒子的大小，表面电荷，或稳定性与制备条件的影响是不够的。因此，在目前的研究中，我们使用离子型凝胶（）和微乳液（μe）方法合成制剂了壳聚糖- DNA，并比较在pH和离子浓度接近实际应用条件的颗粒特性。通过这两种方法，尺寸及表面电荷调制可以很容易地实现，因此，有可能制定的最低毒性和最佳运送到鳃黏膜细胞的理想。2。材料与方法 2.1。材料壳聚糖，脱乙酰85％（纯度99％），琥珀酸二（2乙基己基）磺酸钠（AOT的）学位（分子量110科威特第纳尔）; pentasodium三聚磷酸钠（TPP）的，琼脂糖，溴酚蓝，溴乙锭的DNA分子量标记（金球/ Hind酶切），DnaseI购自Sigma（美国）和其他化学品，分析纯，从里亚尔（印度）。 pSVβgal（质粒DNA）是由CCMB，印度的礼物2.2。纳米粒子的合成方法2.2.1。微乳法壳聚糖纳米粒子的反胶束法制备前面描述的方法。 在简短，壳聚糖（110科威特第纳尔）在醋酸和3ng/μlpSVβGal（质粒DNA）溶液溶解在应运而生- nHexane逆转率μe水的核心。水被用于无效的粒子。酒测氨和戊二醛体积增加了获得交联。正己烷蒸发减少的压力下，干质量和悬浮在水中的超声波。氯化钙溶液加入钙沉淀作为表面活性剂AOT的盐，并通过离心沉淀。上清，一纳米颗粒的水分散体，是透析和进一步研究中。壳聚糖- DNA比值均制备方法为胺/磷酸盐? / P 2.5:1和1:1。该比率定义为（- NH2）的伯胺壳聚糖的最大数量的负磷酸盐的DNA数量。对于N / P比，对交联（- NH2）的数目都认为这两种方法。2.2.2。离子凝胶法合成纳米基于壳聚糖与TPP的离子凝胶。 7壳聚糖（110 kDa的; 85％脱乙酰度）溶解在醋酸溶液（1％），以保持最佳的pH值（3.5-4.0）。到解决方案，水基本TPP经过不断搅拌下混合，在25?三DNA的包封，质粒DNA计算的金额，增加了TPP的解决方案之前，与壳聚糖混合。色散是离心收集上清，为进一步研究透析。 2.3。表征纳米2.3.1。估计大小和zeta（ξ）的潜力大小进行了测量与仪器8000布鲁克海文（美国）。 ξ电位估计使用激光粒度仪ZS的90纳米带M3 - PALS服务技术（马尔文??仪器）。电泳迁移率分布，颗粒表面电荷的基础上，评估采用良好的分散纳米颗粒悬浮于去离子水，在25?三2.3.2。透射电子显微镜（TEM），纳米粒子分散在formvar风干涂铜网和电子显微镜下（2000年日本电子正义与平等运动前200型）查看。2.3.3。红外光谱研究了壳聚糖交联壳聚糖纳米粒子的红外光谱无效被视为KBr压片和记录使用Perkin - Elmer公司红外分光光度计。2.3.4。凝胶阻滞自由的质粒DNA和壳聚糖纳米颗粒受到琼脂糖凝胶电泳。流动性进行了比较与分子量标记。这是可视化后溴化乙锭染色。在研究了体外DNA降解为1小时37?C.当DNA酶I治疗质粒DNA掺杂，未经处理的纳米粒子和自由的质粒DNA在凝胶进行比较评估加载。3。结果与讨论，已在这一假设的虹鳟鱼鱼苗壳聚糖纳米粒的急性毒性，是由于强烈的正电荷与鳃表面带负电荷的静电作用组制定早期研究，导致粘液分泌过多和随后的缺氧。这是基于这样的接触阳离子聚合物已被发现，能明显提高鱼的黏液分泌的事实。 1 Decharging Polyplex公司形成了以鱼改善生存聚合物后处理（50％）。此外，阴离子或中性聚合物显示减少或无毒性相对阳离子聚合物。 1,3因此，可以推测，表面电荷为鳃黏膜起着十分关键的作用交货，是一个重要参数，考虑为此目