分离分析新技术讲解.ppt

6.其他形式色谱 体积排阻色谱 分子筛机理 凝胶过滤色谱 凝胶渗透色谱 优点：操作简单、快捷、流动相选择宽泛 (2)亲和色谱 大多被利用来分离纯化生物大分子 载体：琼脂糖凝胶、交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶 (3)疏水作用色谱 主要分离对象为蛋白质 特点：分离条件温和，易于保持生物蛋白质的活性 7.多种色谱方法的联用 最初分离步骤：如闪蒸色谱、逆流色谱或凝胶过滤色谱等 最后的纯化过程：如HPLC 实例：生物碱 液相色谱法－排阻色谱法 实例：水飞蓟黄酮的提取 水飞蓟：也叫乳蓟，菊科植物，一年或两年生草本 功效：抗肝脏中毒和保护肝细胞 有效成分：水飞蓟素 提取工艺： 水飞蓟种子 去油种子饼 去油种子渣 过滤 提取液 浓缩 总黄酮油液 总黄酮 溶解 上柱 洗脱 浓缩干燥 水飞蓟素 机械榨油 粉碎 提取4次 每次4h 分离植物油 丙酮 硅胶柱 四. 制备色谱技术的发展 关键：色谱过程放大和操作最优化 柱色谱：分辩率高、结合容量大、成本低、放大快速简便 现有色谱分离工艺70％ 连续性色谱技术：移动床色谱、环形色谱、错流梯度色谱 模拟流动床SMB： 特点：设备结构小、放大快速简便、产率高和生产能力大 指纹图谱技术 一.概述 1.中药指纹图谱： 运用光谱、色谱、X-射线衍射或各种技术的联用等现代分析技术，对中药化学信息通过色谱图（液相色谱图、气相色谱图或薄层色谱图等）方式进行表征，并通过计算、分析、比较、评价等过程，以技术参数、指纹特征等加以说明。 制备－分析－比较－评价－校验 分析图谱：准确的辨认√ 精密的测量× 比较图谱：相似√ 相同× 评价结果：模糊属性√ 求索细枝末节× 分析比较的结果：对差异性或一致性作出评价 2.中药指纹图谱的分类： 狭义：中药化学（成分）指纹图谱 广义： 中药材（原料药材）指纹图谱 应用对象 中药原料药（包括饮片、配伍颗粒）指纹图谱 中药制剂指纹图谱 中药化学（成分）指纹图谱 最主要、常用 中药HPLC指纹 测定手段 中药生物指纹图谱 3. 中药指纹图谱研究的目的及意义： 目的： （1）对中药质量控制的补充和提高 （2）控制中间体、成品的一致性，减少批间差异 意义： 中药现代化 表征中药有效物质的整体性和复杂性 推动中药新药研究开发和传统产品的二次开发 4.中药指纹图谱建立的原则： 系统化学成分研究和相同的药理学研究为依托 系统性：应包括中药有效部位所含大部分成分的种类，或指标成分的全部 如：中药人参 皂苷类成分 银杏叶 黄酮类和银杏内酯类 特征性：化学成分信息具有高度选择性，区分中药的真伪和优劣，成为“化学条码” 如：五味子 已知木脂素 未知木脂素 成分之间的顺序、比值 重现性：在规定的方法和条件下，不同操作者和不同实验室应能做出指纹图谱 二.中药指纹图谱的建立 1.指纹图谱测定方法的选定 色谱法：TLC、HPLC、GC、CE 光谱法：UV、IR、NIR 其他方法：X射线衍射法、NMR及联用技术等 HPLC法最常用，具有如下特点： 分离效能高 选择性高 检测灵敏度高 分析速度快 应用范围广 HPLC指纹图谱测定方法的选定 研究对象的确定及预处理 文献调研，确定分析检测目标 例如：黄芪含黄酮、皂苷及多糖三类有效成分 黄芪多糖注射液 多糖 原药材 黄酮、皂苷及多糖 复方：君臣佐使