连续色谱技术在D―核糖纯化中的应用.docVIP

连续色谱技术在D―核糖纯化中的应用 摘 要：采用传统色谱技术和连续色谱技术分别对D-核糖的离交脱盐液和二次结晶母液进行处理，实验结果表明，这两种方法得到的D-核糖纯度和收率均一致，但是连续色谱技术较传统色谱技术的处理量大，得到的产品浓度高，能节省更多的树脂和用水量，也能节省蒸汽的耗量，是一种符合节能减排政策的生产方法。 关键词：D-核糖；连续色谱技术；节能减排 中图分类号：O658 文献标识码：A D-核糖是遗传物质核酸和能量物质三磷酸腺苷（ATP）的组成成分，是生物体内的一种天然戊糖，其具有维持心肌能量和缓解肌肉酸痛等生理功能，也能作为前体合成核苷类药物，具有较好的应用前景。 连续色谱技术近年广泛应用于木糖醇与杂糖的分离、果糖与葡萄糖的分离、甘露醇与山梨醇的分离等方面，连续移动床不仅具有设备体积小、占地面积小等优点，而且分离效率高、流动相消耗低，便于自动化连续性生产等优点。 目前D-核糖的生产主要采用发酵提取的方式，整体工艺流程为：D-核糖发酵液除菌、离交树脂脱盐，接着用色谱层析树脂分离得到纯度95%以上的D-核糖，经过两次浓缩结晶后得到产品；二次结晶母液中的D-核糖需要再次色谱分离纯化。生产上采用传统固定床色谱分离技术来实现纯化，但是传统色谱技术存在物料分离不彻底需要返工造成、产品浓度低造成能耗高等等问题，采用连续色谱技术对D-核糖的离交脱盐液（以下简称“正品”）和二次结晶母液（以下简称“母液”）进行分离是一个重大革新。 1 材料与仪器 1.1 进料 物料来自D-核糖专业生产厂家，将正品通过膜浓缩到200g/L，母液用蒸汽浓缩到600g/L备用。 1.2 设备 Sep Tor 20-4连续移动床、Dow糖层析树脂、阿贝折光仪、雷磁DDSJ-318型电导率仪、日本岛津HPLC高压液相色谱。 1.3 D-核糖含量检测 阿贝折光仪初步确定糖含量范围，采用HPLC法进行糖含量的准确检测。 2 实验方法与结果 2.1 传统色谱技术纯化D-核糖 采用装填了2L树脂的柱子在室温下进行D-核糖正品和母液的色谱实验，试管收集流出液，使用电导仪或糖度仪来判断收集的起、止时间，HPLC检测每管的糖浓度和纯度后将所有收集的物料分成三部分：废液、杂糖和产品，计算各部分的总体积、浓度和纯度。对进料体积和洗脱流速优化后，发现单柱的处理周期为5h，单柱色谱实验得到的结果见表1。 从表1可以看出，传统色谱技术能进行D-核糖的纯化，得到了纯度为96%的D-核糖，但是一步单柱色谱实验没法将料液彻底分离，正品仍有50.2%的料需要返工分离，母液有57%的料液需要返工。 通过计算，处理正品的收率为94.7%，处理母液的收率为90.7%；采用传统色谱技术，每升树脂每小时能处理正品中的D-核糖为4g，处理结晶母液中的D-核糖为3.3g。 2.2 连续色谱技术纯化D-核糖 采用20根柱的Sep Tor连续移动床设备来处理正品和母液，柱子中共装填色谱层析树脂16L，在单柱实验的基础上，进行连续移动床流程的设计，处理正品时的流程如图1所示。 流程简介如下： （1）把连续移动床的20根树脂柱分为4个区，每个区实现不同的功能，其中第一个区1-5#柱为洗脱区，用于洗脱已经分离出来的D-核糖；第二个区6-10#为延长分离区，主要是提高D-核糖纯度、浓度；第三个区11-15#为分离区，主要是分离出杂糖和盐；第四个区16-20#为浓缩回流区，提高杂糖浓度，第四区的出水，可以回用到1区作为进水。 （2）待分离的物料从第三个区进入系统，液流方向从左到右推动结合力弱的杂糖组分迁移，而树脂柱则由右向左逆向移动，把结合力强的组分D-核糖夹带逆向移动，从而实现分离。 （3）经过第二区和第三区的分离，基本实现D-核糖和杂糖的分离，杂糖从第三区流出；而D-核糖则在树脂柱的逆向运动作用下带到第一个区。 （4）D-核糖到达第一个区后，在洗脱水的推动力作用下流出。 （5）杂糖进入第四区后，经过反复上下柱，实现杂糖组分的浓缩，出水可返回到一区循环利用。 由于母液中的D-核糖纯度比正品低，在处理母液时，会将延伸分离区增加到6根柱子，而减少分离区1根柱。 为了得到最佳的实验效果，首先对转盘周期和处理量进行优化，待系统运行稳定后检测产品的纯度和收率，确定连续色谱技术的初步运行条件，接着进行产品浓度和回用水量的优化实验。优化实验结束后连续运行10～15天，考察处理量、产品的浓度、纯度、收率以及水耗量等各项指标；整个实验过程均在室温下进行。实验结果见表2。 实验结果汇总后，以天为单位计算各组分的纯度和收率，得到的平均结果见表2，最终优化的实验周期为260min/圈。 从表2可以看出，连续色谱技术能一步实现D-核糖的分离纯化；从产品纯度上看，处理正品得到的D-核糖纯度能达到97%，收率能达到95.6%；而处理母液得到的D