第8章荧光免疫试验讲解.ppt

2.stokes位移:激发光谱和发射光谱的波长差。 stokes位移小，相互干扰，影响结果准确性。 镧系元素Stokes位移大(273nm)，激发光谱和发射光谱不重叠 时间分辨荧光免疫测定 发射光谱带较窄：613nm±10nm，干扰少 激发光谱带较宽：300nm～350nm，灵敏度高 3.发射光谱和激发光谱 时间分辨荧光免疫测定 4.荧光标记物的相对比活性 比活性 ：单位时间内每个标记分子 可被探测到的信号量。 Eu3+螯合物 反复激发 1000次/秒 大大提高了荧光标记物比活性 时间分辨荧光免疫测定 结合β-二酮体 Eu3+解离 酸性增强液 荧光增强 Eu3+标记抗原抗体复合物 5.信号增强 时间分辨荧光免疫测定 （二）标记物和标记方法 时间分辨荧光免疫测定 （三）方法类型 双抗体夹心法 固相抗体竞争法 固相抗原竞争法 时间分辨荧光免疫测定 （三）方法类型 时间分辨荧光免疫测定（双抗体夹心法）示意图 灵敏度高：最小检出量10-18mol/L 分析范围宽：4～5个数量级 标记物稳定：有效使用期长 测量快速，易自动化 易受污染，本底增高 方法评价 时间分辨荧光免疫测定 光线通过偏振滤光片后，形成一个方向的平面光称为偏振光。 偏振荧光(绿光,525nm～550nm) 偏振光(蓝光,485nm) 荧光物质 二、荧光偏振免疫测定 抗原抗体竞争反应 AgF分子小，转动速度快，偏振荧光弱 AgF-Ab分子大，转动速度慢，偏振荧光强 若待检抗原多，则AgF-Ab少，AgF多，偏振荧光弱 待检抗原含量与偏振荧光强度成反比 荧光偏振免疫测定原理示意图 基本原理 方法评价 样品用量少 荧光素标记试剂稳定，使用寿命长 重复性好 快速，易自动化 适于小、中等分子物质检测 灵敏度较非均相荧光免疫测定法低 荧光偏振免疫测定 第五节 荧光免疫试验的临床应用 1.血清中自身抗体检测 抗核抗体(均质型) 抗核抗体(核膜型) 抗核抗体(斑点型) 一、间接免疫荧光试验 2.各种微生物的快速检查和鉴定 寄生虫（猴胚肾细胞内弓形虫） 细菌（藤黄微球菌 ) 一、间接免疫荧光试验 肿瘤（人肝癌细胞） 间接免疫荧光试验 3、寄生虫感染的诊断 4、白细胞分化抗原的检测 5、人类白细胞抗原的检测 6、肿瘤组织中肿瘤标志物的检测 7、激素和酶的组织定位 （一）时间分辨荧光免疫试验 二、其他荧光免疫试验 1.内分泌学中的应用 2.肿瘤学中的应用 3.免疫学中的应用 4.分子生物学的应用 5.微生物学中的应用 （二）荧光偏振免疫试验 第六节、影响荧光免疫试验的主要因素 一、荧光素-抗体结合物 二、待检标本 三、其他 荧光素-抗体结合物的结合比率： F/P= 一、 荧光素-抗体结合物 抗体效价：双向免疫扩散试验 抗体纯度：高亲和力、单克隆抗体 抗体特异性：吸收试验、抑制试验 荧光素与蛋白质结合的比率（F/P） ------荧光素结合到抗体蛋白上的量 是标记抗体质量鉴定的重要指标 F/P值越高，说明抗体分子上结合的荧光素越多 组织标本：冷冻切片、石蜡切片和印片 细胞标本：涂片、爬片 细菌标本：涂片、爬片 二、待检标本 （一）反应时间和温度 时间：10min～30min （二）荧光抗体的保存 -20℃： 保存2-3年 真空干燥：长期保存 三、 其他 间接免疫荧光试验 其他荧光免疫试验 荧光免疫技术 时间分辨荧光免疫测定 荧光偏振免疫测定 小 结 1 荧光效率是（ ） A 荧光素产生荧光的强度 B 荧光素将吸收的光能转变为荧光的百分率 C 物质产生荧光的效率 D 特异性荧光和非特异性荧光的强度比 E 荧光素接受激发光后，产生的荧光色调 2 最早出现的免疫标记试验是（ ） A 放免 B 荧免 C 酶免 D 化学发光免疫 E 胶体金免疫 齐齐哈尔医学院免疫教研室 第八章 荧光免疫试验 Fluoroimmunoassay 掌握：荧光的基本知识；荧光抗体染色与结果判断。 熟悉：荧光物质。 了解：荧光抗体的制备；荧光显微镜的基本结构；荧光免疫分析；荧光免疫技术的应用。 教学目的 第一节 荧光免疫试验的组成因素 第二节 间接免疫荧光试验 第三节 流式荧光免疫试验 第四节 其他与荧光检测相关的免疫试验 第五节 荧光免疫试验的临床应用 第六节 影响荧光免疫试验的主要因素 荧光免疫试验（fluoroimmunoassay): 以荧光物质标记抗体和抗原，通过与相应抗原或抗体发生特异性结合反应，以此对待测物进行定位、定性和定量分析的检测技术，具有高度特异性、敏感性和直观性，是最早出现的免疫标记技术。 荧光物