第3章《细胞的基本结构》讲解.ppt

线粒体和叶绿体比较 线粒体和叶绿体比较 胞质环流：细胞质流动的一种形式。在液泡发达的植物 如黑藻、 轮藻、伊乐藻 细胞中,细胞质成薄层沿着细胞质膜以一定的速度和方向循环流动。这种不断地循环流动称为细胞质环流。环流的速度,伊乐藻是10 um/s,轮藻是50 um/s。普通植物细胞每秒几微米至几十微米。 第3章 细胞的基本结构 细胞膜 细胞质 细胞 细胞核 细胞壁 细胞质基质 细胞器 （一）细胞质基质 （1）化学成分（2）功能（3）透性特点（4）去壁法 （1）成分（2）结构及特点（3）功能及特性（4）实验 （1）结构（2）功能（3）核质间关系 1.概念 细胞质中除去所有细胞器和各种颗粒以外呈均质半透明的胶状物质，又称“胞质溶胶”。 四、细胞质 2.状态： 呈胶质状态； 可流动 （二）细胞器 2. 分离各种细胞器的方法： 差速离心法 3.内含物： 水、无机盐、脂质、糖类、氨基酸、核苷酸和多种酶。 4.功能： （1）活细胞进行新陈代谢的主要场所 如有氧呼吸第一阶段、无氧呼吸 （2）是细胞器微环境，为维护细胞器正常结构和生理活动提供所需环境。 （3）为细胞器的功能活动提供底物，如氨基酸脱水缩合。 1. 概念： 悬浮于细胞质基质中具有一定形态结构和功能的微结构。 我们还学过什么离心法？ 密度梯度离心法：DNA半保留复制。 差速离心法是根据颗粒大小和密度的不同存在的沉降速度差别，分级增加离心力，从试样中依次分离出不同组分的方法。 差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。 密度梯度离心法是在密度梯度介质中进行的依密度而分离的离心法。各组分会依其密度分布在与其自身密度相同的液层中。密度梯度可以离心前预先制备或在离心中自然形成。可用于分析型或制备型的离心分离。 1:密度梯度离心中单一样品组份的分离是借助于混合样品穿过密度梯度层的沉降或上浮来达到的;差速离心法是用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离。 2:密度梯度离心只用一个离心转速，而差速离心用两个甚至更多的转速。 3：密度梯度离心的物质是密度有一定差异的，而差速离心是适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分。 用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：1）能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；2）PH中性或易调为中性；3）浓度大时渗透压不大；4）对细胞无毒。 不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。 1. 概念： 2.原理： 密度梯度区带离心法（简称区带离心法）： 　　区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。此法的优点是：①分离效果好，可一次获得较纯颗粒；②适应范围广，能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒；③颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。 　　此法的缺点是：①离心时间较长；②需要制备惰性梯度介质溶液；③操作严格，不易掌握。 3. 优点、缺点： （1）差速区带离心法：当不同的颗粒间存在沉降速度差时（不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差）。在一定的离心力作用下，颗粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒（20% 的沉降系数差或更少）或分子量相差3倍的蛋白质，与颗粒的密度无关，大小相同，密度不同的颗粒（如线粒体，溶酶体等）不能用此法分离。 　　离心管先装好密度梯度介质溶液，样品液加在梯度介质的液面上，离心时，由于离心力的作用，颗粒离开原样品层，按不同沉降速度向管底沉降，离心一定时间后，沉降的颗粒逐渐分开，最后形成一系列界面清楚的不连续区带，沉降系数越大，往下沉降越快，所呈现的区带也越低，离心必须在沉降最快的大颗粒到达管底前结束，样品颗粒的密度要大于梯度介质的密度。梯度介质通常用蔗糖溶液，其最大密度和浓度可达1.28 kg/cm3和60%。 　　此离心法的关键是选择合适的离心转速和时间 4. 类型： 　（2）等密度区带离心法：离心管中预先放置好梯度介质，样品加在梯度液面上，或样品预先与梯度介质溶液混合后装入离心管，通过离心形成梯度，这就是预形成梯度和离心形成梯度的等密度区带离心产生梯度的二种方式。 　　离心时，样品的不同颗粒向上浮起，一直移动到与它们的密度相等的等