溶磷真菌PFK―1的解磷能力及其对油菜的促生作用.docVIP

溶磷真菌PFK―1的解磷能力及其对油菜的促生作用 　　摘要：利用固体、液体培养法测定溶磷真菌PFK-1的解磷能力；通过盆栽试验，研究其对油菜的促生作用及对土壤磷素变化的影响。试验结果表明，以Ca3（PO4）2为唯一磷源的液体培养基，接种参试菌株PFK-1，在28℃、120 r/min条件下培养144 h溶磷量高达768.1 mg/L；液体培养基中pH值随溶磷量的增加而下降，在144 h时液体培养基pH值降至1.87，以后仍继续保持在低pH值水平；盆栽试验表明，与单施硝基肥的处理相比，1%、2%微生物与硝基肥复配的处理，油菜鲜重和干重增长率分别为7.19%、22.15%和33.11%、40.88%；土壤有效磷分别增加了30.27%、52.36%。 　　关键词：真菌PFK-1；溶磷能力；促生作用 　　中图分类号：S154.38文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）05-0085-05 　　磷是植物生长发育所必需营养元素之一，是植物体内核酸及多种酶、辅酶、ATP等的重要组成成分，在植物生长发育中的作用仅次于氮[1，2]。土壤中95%以上的磷是植物不易吸收利用的难溶性磷，我国土壤中的磷素含量较低，约74%的耕地土壤缺磷[3]，约66.7%严重缺磷[4]。因此，必须向土壤中施入大量可溶性磷肥，以提高作物产量，但当季磷肥利用率较低，约为5%～10%[5]，大部分磷与Ca2+、Fe3+、Fe2+、Al3+结合形成难溶性磷酸盐，作物难以利用，使得磷元素在土壤中大量积累，降低磷利用率并带来严重的环境污染。 　　近年来，利用植物根际与磷循环相关的生物学系统来调节植物根际磷的有效性，特别是利用解磷微生物来活化土壤难溶性磷，已成为提高土壤磷有效性的研究热点[6]。土壤中具有解磷作用的微生物包括细菌、真菌和放线菌等，其中解磷真菌的溶磷能力较强，而且遗传性状相对稳定。具有解磷能力的微生物能够将难溶性无机磷转化为可溶性磷，它们以自身的代谢产物或者与其他微生物协同作用溶解土壤中难溶性无机磷，以提高土壤中磷的利用率、有机质含量、作物产量，改善土壤结构，并减少化肥的施用量，降低农业成本，是增加土壤中可溶性磷的重要途径之一[7]。 　　本研究对溶磷真菌PFK-1进行了一系列试验，观察其在固体无机磷培养基上溶磷圈大小，测定其对无机磷液体培养基的溶磷能力；在盆栽试验中，研究其对油菜的促生作用以及对土壤中有效磷变化的影响，为利用溶磷菌提高土壤中磷利用率提供一定的参考依据。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　1.1.1供试菌株溶磷真菌PFK-1，由山东金正大生态工程股份有限公司研发中心微生物实验室分离保存。 　　1.1.2培养基马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂18 g，水1 000 mL。用于溶磷真菌的培养。 　　无机磷固体培养基[8]：葡萄糖10 g，（NH4）2SO4 0.5 g，NaCl 0.3 g，KCl 0.3 g，MgSO4 ?7H2O 0.3 g，FeSO4?7H2O 0.03 g，MnSO4 ?H2O 0.03 g，Ca3（PO4 ）2 5.0 g，琼脂 20 g，定容至1 000 mL，pH 7.0～7.5。 　　无机磷液体培养基[8]：葡萄糖10 g，（NH4）2SO4 0.5 g，NaCl 0.3 g， KCl 0.3 g，MgSO4?7H2O 0.3 g，FeSO4?7H2O 0.03 g， MnSO4 ?H2O 0.03 g，Ca3（PO4）2 5.0 g，定容至 1 000 mL，pH 7.0～7.5。 　　查氏酵母膏琼脂培养基（CYA）：K2HPO4 1.0 g，查氏浓缩液 10.0 mL，酵母抽提粉5.0 g，蔗糖30.0 g，琼脂 15.0 g，无菌水 1 000 mL。 　　查氏浓缩液配方： NaNO3 30.0 g， KCl 5.0 g， MgSO4?7H2O 5.0 g，FeSO4?7H2O 0.1 g，ZnSO4?7H2O 0.1 g，CuSO4?5H2O 0.05 g，无菌水100 mL。 　　1.1.3仪器设备主要有Biolog 微生物自动分析系统 （Gen III Microstation 自动微生物鉴定系统）、立式电热蒸汽压力灭菌锅、紫外可见分光光度计、烘箱、空气浴培养摇床、超净工作台、生化培养箱、电子天平。 　　1.2试验方法 　　1.2.1固体培养条件下溶磷能力测定将纯化后的溶磷菌株接种于无机磷固体平板上，重复3次。28℃恒温倒置培养7 d测定菌落直径（d）及溶磷圈直径（D），根据溶磷圈直径与菌落直径的比值（D/d）大小初步确定该菌株溶磷能力的强弱，以无溶磷能力的对照菌株为参照。 　　1.2.2液体培养条件下溶磷能力