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文件名称 无菌检验标准操作规程 文件编号 CBS03-J7-A08 起 草 人 起 草 日 期 年 月 日 审 核 人 审 核 日 期 年 月 日 批 准 人 批 准 日 期 年 月 日 执 行 日 期 年 月 日 颁发部门 质量控制部 印 数 3 分发部门 总 办 质 保 质 控 生 技 提 取 固 体 物 料 设 备 供 销 办 公 针 剂 安 全 工 会 财 务 后 勤 分发数量 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 目的 建立无菌检验标准操作规程，保证检验人员操作规范化、标准化，确保企业产品质量。 范围 本标准规定了无菌检验方法。 责任 质量控制部化验员。 内容 1 标准依据：《中华人民共和国药典》﹙2000年版 第二部﹚。 2 说明 无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。 3 实验准备 3.1 试剂与溶液 75%乙醇、无菌0.9%氯化钠溶液、新洁尔灭（1/1000）溶液、3-5%甲酚溶液或适宜的消毒溶液。 3.2 仪器与用具 电热干燥箱、恒温培养箱、刻度吸管、试管、净化工作台。 3.3 培养基与菌种 3.3.1 硫乙醇酸盐流体培养基、真菌琼脂培养基、真菌培养基。 3.3.2 藤黄微球菌 [CMCC B 28 001]、生孢梭菌[CMCC（B）64 941]、 白色念珠菌[CMCC（F）98 001]、 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]。 4 操作方法 4.1 无菌室的无菌程度检查 4.1.1 无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。 取直径约90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30-35℃预培养48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带入无菌操作室内的洁净区左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将碟盖盖好，置30-35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求：3个平板上生长的菌落数平均不得超过1个。 4.4.2 仪器准备 实验所用的玻璃器皿 试管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管（1、5、10ml）、注射器（2、5、10）、双碟等，用清洁液浸泡，水洗3次。晾干后，用牛皮纸包扎严密，置于电热干燥箱中160℃干热灭菌2小时或140℃干热灭菌4小时。 4.4.3 培养基灵敏度检查 4.4.3.1 菌种 4.4.3.1.1 藤黄微球菌[CMCC B 28 001] 4.4.3.1.2 生孢梭菌[CMCC（B）64 941] 4.4.3.1.3 白色念珠菌[CMCC（F）98 001] 4.4.3.2 操作 4.4.3.2.1 需气菌、厌气菌培养基用藤黄微球菌和生孢梭菌两种菌检查。 取藤黄微球菌的营养琼脂斜面新鲜培养物，加无菌0.9%氯化钠溶液3ml，制成均匀的菌悬液，再以无菌0.9%氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌（CFU）并计数。 取生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基的新鲜培养物，用灭菌毛细管将其吸至灭菌离心管内，离心，弃去上清液，取沉淀菌体用无菌0.9%氯化钠溶液制成均匀菌悬液，吸取上述菌悬液，用无菌0.9%氯化钠溶液稀释，照上述方法制成1ml含10-100个菌并计数。 4.2.3.2.2 真菌培养基用白色念珠菌检查 取白色念珠菌的真菌琼脂斜面新鲜培养物，加无菌0.9%氯化钠溶液3ml，制成均匀的菌悬液，照藤黄微球菌项下方法稀释制成1ml中含10-100个菌并计数。 4.2.3.2.3 取藤黄微球菌的营养肉汤，生孢梭菌的需气菌厌气菌培养基的新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物各1ml，用无菌0.9%氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。 4.2.3.2.4 将藤黄微球菌的上述之一的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述之一的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为12ml的需气菌、厌气菌培养基3管，由白色念珠菌的上述之一的稀释液各1ml，接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天，并逐日记录结果。 4.4.3.3 结果判定 以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。 4.4.4 对照用菌液的制备 4.4.4.1 金黄色葡萄球菌菌液 用接种环取金黄色葡萄球菌的营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至需气菌、厌气菌培养基内，在30-35℃培养16-18小时，用无菌0.9%氯化钠溶液稀