128念珠菌鉴定.docVIP

念珠菌属鉴定法（API 20C AUX） 原理 API20C AUX试验条是由20个含干燥的培养基的小管所组成，其中有19个同化测定。测定杯用半固体最少培养基接种，酵母只生长在它们能利用唯一碳源的底物中。反应的解释是用与对照比较而得，鉴定使用APIPlus计算机程序分析出。 样本准备 2.1 念珠菌细胞呈圆形或卵圆形，直径3-6UM，芽生孢子形态不稳定，从圆、卵圆到伸长。大多数菌落呈奶油色、馅饼状，光滑。革兰氏染色呈阳性。 2.2 将标本接种到沙保琼脂平板上置30℃24-72小时。 2.3 将可疑菌落分纯到另一块沙保琼脂平板或科玛嘉琼脂平板上以便形成较多的纯的培养物。 2.4 要求：细菌培养物必须要纯。收集细菌培养物必须严格无菌操作。 试剂 3.1 试剂名称：API20C AUX酵母菌鉴定试剂盒 3.2 试剂生产厂家：法国生物-梅里埃公司 3.3 25个TESTS 3.4试剂盒组成 25个API 20C AUX酵母菌试验条 25个培养盒 25支0.85%NaCL管 25份报告单 3.5 试剂储存条件及有效期 3.5.1 API 20C AUX试验条和C培养基应储存于2-8℃。 3.5.2 有效期在包装盒上。 操作步骤 4.1 试验条准备 平取培养盘；取5ml蒸馏水加至盘底部的蜂窝状小凹中，而造成湿的空气； 一定要用适当的标记写在盘的盖子上； 4.2 接种的准备 打开一个安瓿的悬浮基物或0.85%NaC或用任何含2ml无菌生理盐水； 用一吸管取一些酵母菌落，制成悬液，其浑浊渡相当于McFarland2单位。 取：1滴酵母悬液于RAT培养基中。2滴放入血清为芽管测定之用。 打开一个安瓿管的C培养基，用灭菌吸管转入100μL（约三滴）前面的菌悬液。轻轻用吸管混匀，避免产生气泡。 4.3接种实验条 用吸管取C培养基中的菌悬液充满杯中。吸管的顶端放在杯的边缘，以防气泡产生。必须小心，不要过满也不要太低，其杯的表面必须是平的，否则，会产生不正确的结果。 水平放入培养盘内，于30℃培养48~72小时。 4.4 读试验条的结果 24和48小时后（部分细菌葡萄糖在48小时还不明确，需培养至72小时），检查生长情况。第一管O作为阴性对照；阳性反应是比对照管更混浊的结果。记录于结果的报告单上。 注：在72小时还不能读结果时，试验结果还需在4天后观察。 当需要重新培养时，为了减少到最低的污染，读结果时必须平放试验条，并需立即放回。 鉴定 鉴定可以用鉴定表进行。将结果报告单与表格中的结果予以比较。为了方便，二者表格的大小是匹配的。 鉴定也可作为API20CAUX编码手册或用APILAB PLUS软件来完成。为此，所得反应的结果必需变换成数字图形。 在结果报告单上的测定结果，以三个为一组，阳性反应相应标为1，2和4。每组内，三个数目加在一起，得到的一个七位数字图形。 请注意：菌丝或假菌丝的存在与否是作为系统中的第21项测定，阳性值为4。 废弃物处理 使用过的所有安瓿管、试验条、吸管和培养盘在处理之前必需高压灭菌、烧毁或浸泡杀菌。 质量控制 7.1 培养基、试验条和试剂的质量在有效期内。 7.2 定期用质控菌株白色假丝酵母菌ATCC14053A或季也蒙假丝酵母菌ATCC6260作试验质控。 参考文献 8.1 《全国临床检验操作规程》第三版。 2006 8.2 BioMerieux标准化的细菌鉴定方法 1999.2 检验科细菌作业指导书 念珠菌属鉴定法 文件编号：WSW-SOP-128 页码：第3页，共3页 版本：2 生效日期：2012-10-01