CHO-S_20100607.docVIP

CHO-S瞬转表达的条件探索 座机电话号码 培养基本条件: 1. 瞬转后细胞密度2x106, 体积10ml, 37℃培养至6x106 2. 分5次添加1x SFM4, 1次2ml/天. 3. 至总体积达20ml时,每天添加1% 10x SFM4 各种营养成份的添加. 在细胞密度达到6x106时, 转移至32℃培养, 以此开始计为第1天, 在第1,3,5,7天多次添加以下营养物质, 每种营养物质设5个浓度梯度: 氨基酸, Transferrin, trace elements, vitamin, insulin, BSA, 柠檬酸铁,脂类 计数细胞及测定产量. 所需细胞瓶数: 8种营养x 5个浓度梯度+ 不另外添加营养的对照2瓶 42瓶 不加VPA VPA添加浓度及时间的影响 1. 确定高密度下VPA的使用浓度 在细胞密度达到6x106时, 转移至32℃培养, 加入不同浓度的VPA, 计数细胞及测定产量. 所需细胞瓶数: 5个VPA浓度梯度 5瓶 2. 确定低温诱导下VPA的补加时间 在细胞密度达到6x106时, 转移至32℃培养, 分5次添加1x SFM4, 1次2ml/天. 分别于第1-5次补液时补加VPA, 计数细胞及测定产量. 所需细胞瓶数: 5个添加时间 同一VPA浓度 5瓶 3.确定37度时VPA的添加时间 在细胞密度达到6x106时, 继续37℃培养, 分5次添加1x SFM4, 1次2ml/天. 当体积分别达到12, 14,16,18,20ml时, 加入同一浓度的VPA, 余下的补液方式不变.当体积达到20ml时,转移至30℃培养, 计数细胞及测定产量. 所需细胞瓶数: 5个添加时间+1瓶不添加VPA至20ml时转移至30℃培养 6瓶 三. 确定低温培养的起始时间 在细胞密度达到6x106时, 继续37℃培养, 分5次添加1x SFM4, 1次2ml/天. 当体积分别达到12, 14,16,18,20ml时, 转移至30℃培养, 不加VPA, 余下的补液方式不变. 计数细胞及测定产量. 所需细胞瓶数: 5个转移时间 5瓶 四. 确定不同细胞密度在batch方式中的表达情况 20ml体积, 细胞密度为2x106时, 4x106, 6x106时, 添加VPA, 转移至32℃培养, 至第2天时每天添加1% 10x SFM4, 或不添加营养, 计数细胞及测定产量和生化参数. 所需细胞瓶数: 3个细胞密度x 添加或不添加1% 10x SFM4 6瓶