CTAB法提取节瓜基因组DNA.docVIP

CTAB法提取节瓜基因组DNA 提取步骤如下： 1.用液氮在2ml的eppendorf管内用研杵研磨,在液氮快蒸发干时迅速加入1000μl 2%CTAB提取缓冲液,混匀后置于65 ℃水浴中温浴50min 每隔5min摇动一次 。 2.静置至室温后在4℃ 下12000rpm离心10min,将上清 约800μl 转移到新的2ml eppendorf管. 3.加入等体积的酚：氯仿：异戊醇 25：24：1 ，颠倒混匀，静置3--5分钟,在4℃ 下12000rpm离心10min,将上清液转入新的1.5ml eppendorf管中. 4.加2/3体积340μl预冷的异丙醇，缓慢混匀 缓慢颠倒20次 .置于-20 ℃下培养30min. 5.在4℃ 下13000rpm离心10min,弃上清.加入200--300μl预冷的 70%乙醇洗涤DNA沉淀 两次 ,微干. 6.加200μlTE 稍多加 ,溶解DNA加5μl 10mg/ml RNAse 37℃ 水浴60min。 7.加入等体积200μl预冷的氯仿:异戊醇 24:1 混匀。静置10min，12000rpm离心10min。 8.取上清加入1/10 总 体积的NaAc 3mol/L,2倍体积冷的无水乙醇.-20 ℃ 放置30 min或更长时间 过夜沉淀DNA量多但可能会有杂质 ,在4 ℃下13000rpm，离心10min。 9.用70-80%的 冷乙醇洗涤沉淀两次,超净工作台吹干 可用95%乙醇 。 10.加50-100μl ddH2O使沉淀溶解。-20℃保存备用。 CTAB抽提缓冲液: Tris-HCL 100Mm Ph 8.0 EDTA 20mM Nacl 1.4M CTAB 2% β-巯基乙醇 1% PVPP 1%