蛋白质工程重点内容总结解析.docVIP

蛋白质工程试验项目 实验一 聚丙烯酰胺凝胶电泳制备 实验二 豌豆植物可溶性总蛋白提取及电泳 实验三 豌豆蛋白凝胶电泳后染色、脱色及观察 实验四 含目的蛋白ERAF17菌种活化及药品配制 实验五 BL21-ERAF17 目的蛋白基因的检测 实验六 目的蛋白ERAF17的诱导表达及蛋白处理 实验七 目的蛋白质电泳、染色、脱色及对比观察 实验一 聚丙烯酰胺凝胶电泳配制 【实验目的】：通过本实验熟悉聚丙烯酰胺凝胶的配置技术。 【实验原理】：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂TEMED和催化剂过硫酸铵的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，可以根据蛋白质带电荷、分子量大小等将蛋白质分离，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳简称PAGE。 【实验设备及药品】：垂直板凝胶电泳设备、移液器、烧杯、单体丙烯酰胺、交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺、加速剂TEMED和催化剂过硫酸铵。 【实验步骤】SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶溶液配制 溶液成分 总体积 5ml 总体积 10ml 总体积 15ml 总体积 20ml 总体积 25ml 总体积 30ml 15% 水 1.1ml 2.3ml 3.4ml 4.6ml 5.7ml 6.9ml 30%丙烯酰胺 2.5ml 5.0ml 7.5ml 10.0ml 12.5ml 15.0ml 1.5MTris(pH 8.