控制菌(大肠埃希菌检查操作规程.docVIP

文件类型 操作规程（SOP） 文件编号 编 制 人 编制日期 年 月 日 编制部门 审 核 人 审核日期 年 月 日 审核部门 批 准 人 批准日期 年 月 日 颁发部门 编订依据 《中国药典》2010年版、《GMP》2010年版 替代文件 控制菌（大肠埃希菌）检查操作规程 目的 建立一个控制菌大肠埃希菌控制菌大肠埃希菌检查标准工作程序，规范QC控制菌大肠埃希菌检查人员的控制菌大肠埃希菌检查的操作。 范围 适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的控制菌大肠埃希菌的检测。 责任者 QC控制菌大肠埃希菌检查人员；质量管理部 内容 4.1检测准备 4.1.1 QC人员接到控制菌大肠埃希菌检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定控制菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培养基等项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行控制菌大肠埃希菌检查前的准备工作。 4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。 4.2 供试液的制备 4.2.1 供试液 供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。 4.2.2 供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。 4.2.2.1 可溶性液体供试品 文件名称 控制菌大肠埃希菌检查操作规程 文件类型 操作规程（SOP） 文件编号 编订依据 《中国药典》2010年版、《GMP》2010年版 替代文件 取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。 4.2.2.2 非水溶性液体供试品 油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。 4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品 称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。 4.2.2.4 非水溶性供试品 取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。 4.2.2.5肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10 g，加PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1:10的供试液。 4.2.2.7具抑菌成分供试品 当供试品抑菌活性时，应消除供试液的抑菌活性后，再依法检查，一般使用培养基稀释法，取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。取低稀释级供试液（原液或1:10的供试液）2份，每份各1ml，分别注入5个或5个以上平皿中（每皿0.2ml或0.2ml），每个平皿倾注培养基约15ml，混匀，凝固后，倒置培养，按每1ml分注的平皿点计菌落数之和计数，即为每1ml的菌落数，共得2组数据，再以2组数的平均数乘以稀释倍数的值报告菌数。 4.2.2.8 供试液的制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃，时间为30min。  文件名称 控制菌大肠埃希菌检查操作规程 文件类型 操作规程（SOP） 文件编号 编订依据 《中国药典》2010年版、《GMP》2010年版 替代文件 4.3检验操作 4.3.1 操作程序 4.3.2培养基选择与标记 4.3.2.1 增菌培养使用胆盐乳糖（BL）培养基，标记符号为BL 4.3.2.2 快速生化试验使用4-甲基伞形酮葡萄苷酸蛋白胨培养基，标记符号为MUG 4.3.2.3 分离培养使用曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB） 控制菌大肠埃希菌检查操作规程 文件类型 操作规程（SOP） 文件编号 编订依据 《中国药典》2010年版、《GMP》2010年版 替代文件 4.3.2.5 乳糖发酵试验使用乳糖（RT）培养基、5%乳糖培养基，标记符号为RT 4.3.2.6 靛基质试验（I）使用蛋白胨水培养基，标记符号为RT标记符号为I 4.3.2.7 甲基红试验（M）