BCA法蛋白定量.docVIP

BCA法蛋白定量 1 取干净的96孔板，在每个孔中加入20μL的蛋白标准品或蛋白样品。 2 每个孔中加入100μL BCA工作试剂，轻微震荡混匀30s，用不干胶纸覆盖该96孔板。 3 37℃温育30min。 4 取出96孔板，放冷至室温。 5 上酶标仪检测上OD562nm的读数。 6 制作标准曲线，根据标准曲线进行蛋白样品浓度的计算。 预处理：电泳前，计算好上样量，上样体积。样品加入1×SDS loading buffer。并于干式恒温加热器100℃，煮沸10min。 还原型5×SDS上样缓冲液（0.25mol/L Tris·HCl pH6.8，0.5mol/L二硫叔糖醇，10％ SDS，0.5％溴酚蓝，50％甘油）配方如下： 0.5 mol/L Tris·HCl（pH6.8） 2.5mL 二硫叔糖醇（DTT，MW154.5） 0.39g SDS 0.5g 溴酚蓝 0.025 甘油 2.5mL 混匀后，分装于1.5mL离心管中，4℃保存。 3.11.3 SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳 开始实验前，先根据待检测抗体对应的原始抗原的分子量大小，计算出胶的浓度，并算出分离胶各组分的用量。装好架子，按照下面配方配制10％的分离胶。在胶上面加入一层无水乙醇，促进胶更好的凝集。待分离胶凝集后，配制4％的浓缩胶，插入预先准备好的1mm梳子。 10％分离胶和4％浓缩胶配方如下： 10