Chapter2MutationandRepairofDNA详解.ppt

* * 剂 量 每一种诱变剂对于每种生物有着特定的最适剂量。 可以用一个便于测定的突变来测定最适剂量。 剂量的选择与诱变目的有关，若是质量性状，由单基因控制，可采用高剂量；若是数量性状，由多基因控制，不能采取过高的剂量。 确定最适剂量的曲线： * * 诱变产量性状时诱变剂及剂量的特点 诱变剂的作用不是提高绝对产量，而是增加 变异幅度。 最适剂量处理，变异幅度最大。 高剂量处理，首先消失高产菌株。 * * 二、突变型的筛选 （一）高产菌株的筛选 1. 此类突变的特点： 渐进式，引起表型变异的基因数量多。 高产、低产菌株与出发菌株在形态上无明显的区别。 易受环境条件的影响，高产菌株在一定条件下才表现。 * * 2. 如何提高初筛效率？ 对产酸菌，初筛时加酸碱指示剂 对水解酶类产生菌，加底物观察水解透明圈 对抗生素产生菌，用敏感细菌观察抑菌圈 3. 筛选多少单菌株？ 取决于突变频率 * * （二）营养缺陷型的筛选 所用培养基： 1 完全培养基 CM (＋) 能满足任何缺陷型的需要，由有机成分组成。 2 基本培养基 MM (－) 能满足野生型需要，由无机成分组成。 3 限制培养基 LM (＋) 在基本培养基中加入完全培养基成分。 4 补充培养基 （met）（his） 在基本培养基中加入某一类营养物质，满足某一种营 养缺陷型的要求，如补加蛋氨酸或组氨酸。 * * 青霉素浓缩法原理： 青霉素只能杀死生长繁殖的细菌，不能杀死停止分裂的细菌。在MM中，只有野生型能生长，则被杀死，而营养缺陷型由于不能生长而被保护下来，得以浓缩 青霉素浓缩法过程： 1．营养缺陷型的浓缩 * * 菌种 1 诱变剂处理 置完全培养基 2 培养4～6h,离心 无氮基本培养基 3 氮饥饿4～6h, 离心 含青霉素的基本培养基 4 培养6～8h 取样分别涂布CM和MM * * 5 培养 观察效果 若CM、MM上菌数接近，效果 不明显若CM菌数多, MM上菌数少,效果明显 分离鉴定 * * 青霉素浓缩法主要步骤的原理： 第2步：使DNA复制、转录和表达得以进行，顺利的修复，以使前突变事件固定下来；克服延迟现象。 第3步：耗尽体内的代谢库，否则在青霉素处理时会因为生长而死亡 第4步：野生型继续生长，细胞壁合成受到抑制，细胞死亡；突变型不能生长，故免于死亡，保存下来。 * * 逐个测定法：浓缩后的菌液接种完全培养基，长出菌落后，将每一菌落分别接种基本培养基和完全培养基，凡是在前者上不长的就是营养缺陷型 夹层培养法：在培养皿制备三层基本培养基，中间一层含细菌，待长出菌落后做标记，再倒一层完全培养基，再出现菌落则为营养缺陷型。 影印培养法：见下图 2 营养缺陷型的检出 * * * * 生长谱法 将待测细菌（106－108）混进基本培养基， 倒入培养皿，凝固后在标定位置放置少量的氨基 酸、碱基等粉末。经培养后可以看到营养缺陷型 在所需要的化合物周围出现生长现象 生长谱法优点： 方法简便，1个培养皿上可检测多个化合物 污染和回复突变均不影响测定结果 不必考虑浓度，化合物可以扩散，自然形成浓度梯度 3 营养缺陷型的鉴定 * * 为了简化测定，可将21种化合物合成6组，见下表 组别 化 合 物 代 号 A 1 7 8