重组人亲环素A的表纯化-1104班吴敌.docVIP

Cyclophilin A的表达及纯化 报告题目 Cyclophilin A的表达及纯化 作者姓名 吴敌 班级学号 1104班2011114020409 指导教师 张新潮 完成时间 2014年11月 生物学实验教学中心  重组人亲环素A(rhCyPA)的表达纯化 吴敌（指导老师：张新潮） （湖北师范学院生命科学学院生物技术1104班 湖北 黄石 435002） 摘 要：将亲环素A基因片段插人原核表达载体pET 中, 得到重组质粒p ET-CyPA , 转入大肠杆菌获得高效表达。重组有CyPA基因的大肠杆菌M15在含有氨苄青霉素（100ug/ml）和卡那霉素（25ug/ml）的LB培养基中培养，当A600达到大约0.5时，终浓度为1mM的异丙基硫代–B-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养6h。提液经DEAE-Sepharose CL-6B柱层析得到纯化的重组CyPA。 β-转角及无规线团，8条反平行的β-折叠片段分别与环(Loop)和包埋于件折叠片段两端的3条α-螺旋相连接，形成一个右手R-桶型结构，内部形成疏水中心。 亲环素A (Cyclophilin A CyPA)具有肤基脯氨酸顺/ 反异构酶(PPIase)