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Weastern bloting 一、实验目的与原理Western bloting技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法，由蛋白质的SDS、电转及杂交几部分组成。杂交技术主要有NC膜封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗和二抗的反应，显色等组成。将凝胶上的蛋白质转移到NC膜上，用其他蛋白作为封闭液，将膜上余下的其他蛋白结合位点封闭，加入与检测蛋白特异性的第一抗体，经免疫反应，一抗与靶蛋白结合，经洗膜液洗涤后，膜上仅在靶蛋白上结合抗体。在加入与第一抗体有免疫特异性的二抗，使之与一抗反应，反应后，经洗膜液洗涤，二抗仅存在于结合靶蛋白的一抗上。因为这种二抗都为酶标抗体，通过酶标反应，在显色液中，膜上结合靶蛋白—一抗—二抗的位置即将呈现一定的颜色。二、材料与方法1.材料从微生物细胞中提取的多酚氧化酶（PPO）：10μl，20μlNC膜：硝酸纤维素膜2.仪器：电转移槽，电泳仪，塑料封口机，摇床3.试剂：转移缓冲液：48Mm Tris,39mM甘氨酸，0.037%SDS同时加入20%乙醇。封闭液与稀释液：PBS（牛血清白蛋白）辣根过氧化物酶显色液：现配现用三、操作步骤1.SDS电泳见上个实验2.电转剪NC膜大小、滤纸与凝胶板一致，浸泡在转移缓冲液中5min。在转移装置中依次将三层滤纸、凝胶、滤纸、三层滤纸放在一起。将装好的转移装置放入电转移槽中NC