细胞增殖、凋亡、粘附的测定方法解析.doc

细胞增殖的检测方法： 四甲基偶氮唑盐法 MTT MTT 商品名为噻唑蓝， 是一种黄色的染料。1983 年Mosmann 建立MTT比色法，用于检测细胞存活和增殖。其原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为不溶于水的蓝紫色结晶-甲瓒 formazan 并沉积在细胞中，而死亡的细胞无此功能。二甲基亚砜 DMSO 能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫分析仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数量范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。此方法已广泛用于各种细胞增殖的检测、肿瘤细胞的生长、生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定[4-8]等。此方法简便、灵敏且无放射性。 MTT 溶液需要放置在4℃避光保存，最好是现用现配。由于MTT 经还原所产生的产物甲瓒不溶于水，无法直接测定吸光度，需要被溶解之后才能检测。这不仅使工作量增加，而且MTT 溶液具有致癌性。需要注意的是，MTT 法只能用来检测细胞相对数和相对活力， 但不能测定细胞的绝对数。另外， 有研究发现过氧化物会降低MTT 测定的准确度，抑制将近95%的MTT 与O2－的反应，MTT 溶解产物甲瓒会吸附在纳米纤维上， 而致使检测的结果呈现假阴性。 内盐法 MTS MTS 是一种新型的MTT 类似物。MTS 在偶联剂PMS 存在的条件下， 可被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还