一级菌种制作技术MicrosoftWord文档.docVIP

第二章 制种技术 第二节 一级菌种制作技术 一、概述 1．概念 一级菌种：是第一次用孢子分离法、组织分离法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转管扩大后的菌丝体。 2．用途及要求 在食用菌生产中，一级菌种主要用于扩大繁殖成二级菌种，再由此扩大繁殖成三级菌种，供栽培用。因此，一级菌种是菌种生产的基础，一级菌种质量的优劣，直接关系到二级菌种和三级菌种的质量，对食用菌生产产生根本的影响。因此，要求一级菌种必须纯度高，质量好。 3、制种过程 一级菌种的制作过程，主要包括下列几个程序： 培养基的配制à培养基的灭菌à菌种的分离à纯化(提纯)à转管扩大à培养à一级菌种 二、一级菌种培养基的配制 (一)基本要求 营养成分：要想培养出优良的一级菌种，必须提供优良的培养条件，首先是营养条件。一级菌种培养基必须营养全面且易于吸收。 容器：一级菌种培养基通常用玻璃试管作容器，按不同的配方加上琼脂凝固剂，制成琼脂斜面培养基，又叫斜面培养基，简称斜面。 斜面：斜面培养基平整光滑，一级菌种在斜面上培养，利于观察菌丝生长情况，又便于检查有无杂菌生长。 用途：斜面培养基主要用于一级菌种的分离、培养、提纯和保藏菌种等。 此外，也可用培养皿或三角瓶作容器，制成玻璃平板培养基，主要用于菌种的分离、培养和提纯等。 (二)一级菌种培养基常用的材料 在配制一级菌种培养基时，选用的原材料要具备以下二个条件：一是要能满足食用菌的营养需要；二是所用原材料来源广，成本低。 一级菌种培养基常用的材料有：马铃薯、葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母膏、黄豆饼粉或黄豆粉，KH2PO4、K2HPO4、MgSO4、VB1等；琼脂(凝固剂)；2%的HCl溶液，2%的NaOH溶液。 琼脂(又称洋菜)：是一级菌种培养基常用的凝固剂，是由红藻中的石花菜提取出来的半乳糖、杂多糖的硫酸酯。 琼脂的特点： ① 性能稳定，不能被一般微生物分解，仅仅起凝固作用。 ② 大约96℃熔化为溶胶，40℃以下时又重新凝固成透明的胨胶，而且反复熔化、凝固不会改变其性能。 ③ 一般培养基的琼脂用量为2%。根据使用的目的和季节变化，用量在1.8%～2.3%之间。夏季气温高，蒸发量大，琼脂用量可适当多些，冬季可适当减少用量。 (三)一级菌种培养基常用的配方 1．常用配方 PDA培养基 PSA培养基 马铃薯(去皮) 200g 马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g 蔗糖 20g 琼脂 18～23g 琼脂 18～23g 水 1000ml 水 1000ml 这是食用菌一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养与保藏。它既是一种广泛培养基，又是一种基础培养基(即以PDA或PSA为基础，添加适量的其它物质，便能衍生出一系列的培养基)。 注：有关一级菌种的培养基配方众多，可参考课本或其它专业书籍。 2．一级菌种培养基配方设计 从上述培养基配方中可看出，组成一级种培养基的材料大致可分为四种： ① 天然的有机物：如马铃薯、黄豆粉、玉米粉、黄豆芽、松针等。应选择新鲜、无霉味、无虫蛀、无变质的优质材料，经热浸提后取滤液入料，为食用菌生长提供全面的营养。 ② 可溶性的有机营养制剂：如麦芽浸膏、酵母浸膏、蛋白胨、蔗糖、葡萄糖等。主要是为食用菌生长提供优质的碳源和氮源，要求纯度高，保藏良好。 ③ 矿物质：如KH2PO4、K2HPO4、MgSO4、CaCO3、CaSO4等。多在改良培养基或综合培养基中作为食用菌对矿物质需求的补充剂，同时对培养基物理性状的改良起重要作用。其用量为0.01%～0.5%。 ④ 琼脂：是固化培养基最常用的凝固剂，一般用量为2%。实际工作中，常因制种季节不同，分离途径不同，培养对象不同，琼脂的用量也不同(用量在1.8%～2.3%之间变动)。 如：孢子分离：需要吸水膨胀，少用琼脂à冷凝水； 组织分离：多用琼脂à培养基表面宜干à避免污染 (四)一级菌种培养基的配制 一级菌种培养基配方较多，原料较多，但制作方法大致相同，其制作过程如下： 　 补充内容——平板培养基的制作 平板培养基常用于单孢分离，测定菌丝生长速度，观察菌落的形态，拮抗实验，测定接种空间杂菌数。 制作方法： ① 将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。高压灭菌或干燥灭菌后备用。 ② 取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内，略打开灭菌过的培养皿盖(露一小缝)，倒入培养基(厚度为0.5cm)，