芥子油苷测定方法解析.docVIP

高效液相色谱对芥子油苷的提取和分离 I 准备阶段： 1. 水浴锅设置80℃ 2.配制两瓶70%的甲醇，其中一瓶置于水浴锅中温浴。 3.5mM苄基芥子油苷.2.33mg/ml 4.0.5M醋酸盐（PH=5）[30mlHAC，960ml H2O，加10-20g NaOH粉末，调至PH=5] 5.20mM的醋酸盐，PH=5：将4中的稀释25倍 6.DEAE sephadex A-25：称取3g 树脂，加90ml 0.5M 醋酸盐（PH=5）室温过夜溶解。 7.硫酸酯酶：15mg溶解于6ml 20mM 醋酸钠中，PH=5（16100uM/hour/g） II 芥子油提取 1. 取新鲜莲座叶，鲜重5-10mg 2. 放入1.5mlEP管中，迅速放入液氮。 3. 研磨成粉末后并加入1ml 预热的70%的甲醇。 4. 加入50ul 5mM 的苄基芥子油苷 5. 盖好盖子漩涡震荡置于冰上，剩下的样品重复步骤3-4。 6. 所有的样品置于80℃10min。 7. 4000rpm，10min。 8. 将上清液转移至1.5 的离心管。 9. 用预热的甲醇重新提取两次，收集所有的上清液至4ml，-20℃保存。 III 芥子油苷的脱硫纯化 1. 搅拌DEAE sephadex A-25 树脂成溶液，用1ml的移液器取1ml加入BioRad