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毕业论文 题 目学 生 姓 名学 号 指 导 教 师：专 业 年 级： 所在学院和系： 完 成 日 期： 牛羊布氏杆菌病的检疫 （索南才让，青海大学农牧学院 西宁 邮政编码：810016） 摘要： 布氏杆菌病是由布氏杆菌( Brucella) 引起的以流产和发热为特征的一种全世界广泛分布的人畜共患慢性细菌传染病1。 严重威胁着人和多种动物的生命健康。我们这次对采集自青海大学农牧学院动物医学动物棚中的羊血清和牛血清，运用检疫常用虎红平板凝集试验( RBPT) 、试管凝集试验( SAT) 对这些血清进行对动物棚中的这些动物进行布氏杆菌病的检疫。 关键字:布氏杆菌病，牛羊血清 1 材料和方法 1.1仪器与试剂 仪器：主盒、纱布、蒸馏水、针头（16#）带乳胶管、牛鼻钳、缰绳、试管、硅胶塞、记号笔、试管架、毛细滴管、吸管、4℃冰箱、温箱、印管、酒精棉球。 平板凝集实验：载玻片、红蓝铅笔、吸管（10ml、5ml、1ml）、脱脂棉、纱布、针头（4# ~5#）、报纸、绳子、优质虎红、酒精灯、镊子。 试管凝集：试管、标准比浊管、介质（羊10%氯化钠溶液、牛0.5%硼酸生理盐水）、盐水瓶、布氏杆菌病虎红平板凝集抗原、试管凝集抗原。 1.2方法 1.2.1采血：在牛颈部1/3处，直径10公分，酒精棉球消毒，左手捏住颈静脉扎针采血至中试管1/3处。采集后的血液在温箱中静置1h，在冰箱中静置1h，使血清充分分离。 1.2.2虎红平板凝集实验： 将玻璃板分为四个区，左上、右上、左下、右下分别标为1、2、3、4。分别在1、2、3、4处滴加血清0.08ml、0.04ml、0.02ml、0.01ml。 分别在四块待检区滴加0.03ml抗原，用牙签类小棒搅动使之混合。 判定：受检血清在4min内肉眼可见凝集现象可判为阳性（+）。无凝集现象，呈均匀粉红者判为阴性（-）。 1.2.3试管凝集实验: 一个组选一人准备7只试管，分别标为1、2、3、4、5、6、7号，在1号试管5ml吸管加入介质（如检测羊血清则为10%氯化钠溶液，如检测牛血清则为0.5%硼酸生理盐水）2.3ml，在2、3、4号管中用1ml吸管加入介质0.5ml，在5号管中加入1:12.5的阴性血清，在6号管中加入1:12.5的阳性血清，在7号管中加入抗原。1~4号管为待检管，5号管为阴性血清对照，6号管为阳性血清对照，7号管为抗原对照。 在1号管中用5ML吸管吸取牛（羊）血清0.2ml，然后在从1号管中吸取1.5ML混合液弃去，再在1号管中吸取0.5ML加入2号管中，将2号管吹吸混匀后吸取0.5ml加入到3号管中，将3号管吹吸混匀后吸取0.5ml加入到4号管中，吹吸混匀，然后在4号管中吸取0.5ml混合液弃去。分别在5、6、7号管中加入0.5ml的牛（羊）血清。 其余人只做上述步骤中1~4号试管的制备。 制备标准比浊管：准备5只试管，如表格 管号 介质 1:40抗原 透明度 判定 1 1.0ml 0 100% ++++ 2 0.75ml 0.25ml 75% +++ 3 0.5ml 0.5ml 50% ++ 4 0.25ml 0.78ml 25% + 5 0ml 1.0ml 0 - 置于37℃温箱培养25h，取出检查并记录结果。 判定： 凝集反应程度分为：参照比浊管，按各试管上层液体透明度判读 ++++菌体完全凝集，100%下沉，上层液体100%透明。 +++菌体几乎完全凝集，上层液体75%透明。 ++菌体凝集显著，液体50%透明。 +凝集物有沉淀，液体25%透明。 -凝集物物沉淀，液体均匀浑浊。 1:100血清稀释度出现“++”以上凝集现象时，受检血清判定为阳性。2 2 结果 2.1羊血清检测结果 试管凝集实验结果（共四个大组） 第一组 管号 判定结果 1 2 3 4 5 6 7 羊1 + + ++ ++ - ++++ + 羊1 + + ++ ++ 羊3 + + ++ ++ 第二组 管号 判定结果 1 2 3 4 5 6 7 羊18 ++ ++ ++ ++ - ++++ + 第三组 管号 判定结果 1 2 3 4 5 6 7 羊2 +++ +++ +++ +++ ++++ +++ +++ 羊2 + + + + 羊2 + + + + 第四组 管号 判定结果 1 2 3 4 5 6 7 羊 +++ +++ +++ +++ - +++ +++ 实验结果：第一组检测全为阴性，第二组检测为阴性，第三组有一个呈阳性反应，而两个位阴性，故为疑似，第四组检测为疑似