再障的骨髓片检查.docVIP

再障的骨髓片检查 详细内容： 一、制片 骨髓涂片制作方法与血片制作方法基本相同，但因有骨髓小粒和脂肪滴，有核细胞较多，因此较血液粘稠，推片略难于血片，推片时角度要小一些，速度要慢一些，避免骨髓片过厚。 二、染色 传统的骨髓涂片染色方法多用在Romanowsky染色基础上改良而成的Wright和Giemsa染色法。20世纪70年代，显微分光光度计和电子计算机的广泛应用，传统的形态学描述已开始被精确科学的数字所取代，常规的骨髓细胞染色方法也随之被重新研究和改良，形成了一些新改良的骨髓细胞染色方法。目前，临床常用的染色方法主要有： （一）瑞氏 Wright 染色 Ⅰ液：瑞氏染料 伊红、美蓝 1.0g，AR级以上甲醇600ml，甘油15ml。 Ⅱ液：磷酸盐缓冲液 pH6.4~6.8 使用时滴加Ⅰ液3~5滴0.5~1min后滴加等量Ⅱ液，染5~10分钟 （二）吉姆萨 Giemsa 染色 Ⅰ液：吉姆萨染料 伊红、天青 1.0g，甲醇66ml，甘油66ml。 Ⅱ液：磷酸盐缓冲液 pH6.4~6.8 使用时用Ⅱ液将Ⅰ液稀释10-20倍，染色10~30min。 （三）Marshall提出的标准化的Romanowsky染色 Ⅰ液：美蓝9.0mg，天青B thiocyanate 17.0mg，伊红13.0mg溶解于20ml1:1甘油甲醇。 Ⅱ液：0.00132M的sorensen磷酸盐缓冲液 pH6.4~6.8 ，使用时将Ⅰ液用100mlⅡ液稀释，染色10min。 四 R-G Romanowsky- Giemsa 染色 Ⅰ液：天青B130mg，伊红Y65mg分别溶解于50ml甲醇作为贮存液。 Ⅱ液：0.00132M的sorensen磷酸盐缓冲液 pH6.4-6.8 使用时将Ⅰ液用Ⅱ液稀释，染色10min。 五 wittekind1987年介绍的R-G染色 Ⅰ液：天青B750mg溶于75mlDMSO，伊红Y120mg溶于25mlDMSO混合作为贮存液。 Ⅱ液：1:25V/VpH6.5HEPES缓冲液。 使用时将Ⅰ液用Ⅱ液稀释，染色15~35min。 三、骨髓涂片、染色的质量保证 涂片和染色过程中应该注意的问题主要有： 1．载玻片要洁净，手指不要触及玻片表面。 2．穿刺后立即涂片并送检，避免血液凝固同时保证骨髓涂片在新鲜状态下染色。如遇特殊情况，陈旧玻片再染色时间不宜超过一周，以免蛋白质变性，染色偏碱和形态变异。 3．涂片一般不用抗凝剂以免影响细胞形态。 4．涂片时注意保留片尾和边缘，因体积较大的细胞多在此处。 5．应取骨髓小粒多的骨髓液制作涂片，至少要6～10张，自然干燥。 6．涂片制成后，应在空气中快速摇动或吹干，防止细胞皱缩或溶血。 7．骨髓涂片固定和染色的时间要较血片略长，最好放在低倍镜下观察，待染色满意时再冲洗。 8．若染色过浅，可于涂片干燥后重染，如染色太深可于干燥后滴加甲醛数滴，稍停后冲洗 四、骨髓涂片检查的内容及程序 一 检查步骤 （骨髓涂片检查） 1．低倍镜检查 1 观察涂片情况　观察涂片制作及染色是否满意，取材是否是真正的骨髓液等。若取材不好、涂片过厚、染色较差，则分类计数结果将不可靠，甚至造成误导，应另选涂片、染色较好的骨髓片进行检查，或重新取材。 2 判断有核细胞增生程度　低倍镜下选择细胞分布均匀部位观察骨髓片有核细胞增生情况，根据骨髓片中有核细胞的密度或有核细胞与成熟红细胞的比例来估计有核细胞的增生程度。对增生减低的标本，应观察全部送检骨髓片，以免漏检有代表性的标本。 骨髓有核细胞增生程度通常分为五级，见表2-2-1。当增生程度介于两级之间时，则将结果划为上一级。例如在增生活跃与增生明显活跃之间时，可判断为增生明显活跃。在临床上这种增生程度的判断在很大程度上靠检查者的经验来估计。 骨髓增生程度的判断受骨髓取材好坏的影响很大，一般来说，只有当涂片中存在骨髓小粒时才宜于估计其增生程度，所以在骨髓穿刺时，最好将多余的穿刺液收集起来制作病理切片，通过组织切片观察骨髓小粒中的造血细胞多少更具有真实性和可靠性。 表,骨髓有核细胞增生程度五级估计标准 3 观察全片巨核细胞的数量　巨核细胞数量变化较大，一张骨髓涂片上可有7~133个，平均36个。如将骨髓膜标准化为1.5cm×3.0cm 4.5cm2 ，则参考值为7~35个。在一般的骨髓检查报告单上可凭经验分为易找到、不易找到、增多三级记述。但在巨核细胞明显增多或疑为特发性血小板减少性紫癜时，则应作全片巨核细胞计数，并作分类。即在低倍镜下每见到一个巨核细胞，即用高倍镜或油镜确定其发育阶段和有无血小板形成，至少观察25个巨核细胞。 4 观察骨髓片边缘和尾部　注意寻找有无体积较大的或成堆的特殊病理细胞，如转移癌细胞、多核细胞、尼曼-匹克细胞、戈谢细胞、Reed-Stember