2.1微生物的实验室培养--公开课分析.pptVIP

　　3.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（　　） ①大肠杆菌　②霉菌　③放线菌　④纤维素分解菌 A.④②　　B.①②　　　C.①③　　　D.③④ A 牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 分析营养构成？ 3. 配制原则 ⑴目的明确： ⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当 ⑶适宜的pH值： 有机碳源 异养型： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 无机碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱，真菌偏酸 （CO2碳源） 生产 科研 思考? 1. 获得纯净培养物的关键？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 （三）无菌技术 防止外来杂菌的入侵 比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 物体表面或内部的部分微生物 不能 灭菌 强烈 物体内外的全部微生物 能 3. 消毒和灭菌有何不同？ 芽孢：某些特殊种群的细菌休眠体，对热、碱、 酸、高渗以及辐射均有强耐受性。 ①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min。 ③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒:照射30min。 ⑴.消毒的方法： 4.常用的消毒与灭菌的方法 针对物体表面和空气中的微生物，所用器械是 紫外灯 。照射30min，可先喷洒石炭酸或煤酚皂溶液加强消毒效果。 紫外线消毒 灭菌方法 处 理 方 法 适 用 范 围 灼烧灭菌 直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧层燃烧 ①微生物的接种工具 接种环、接种针 或其他金属用具 ②试管口或瓶口等容易被污染的部位 干热灭菌 干热箱内 160－170℃ 加热1－2h 能耐高温的需要保持干燥的物品如玻璃器皿（吸管、培养皿 和金属用具等 高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min 通常用于培养基的灭菌 2 灭菌的方法： 无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 超净工作台 体积小，结构简单，易培养，生活周期短。 实验操作 以培养大肠杆菌为例: 通过培养基的配制说明大肠杆菌（厌氧）的新陈代谢类型是： 异养厌氧型 第一步：制备牛肉膏蛋白胨培养基 1.计 算 2.称 量 3.溶 化：牛肉膏（连同称量纸） 蛋白胨 和氯化钠 琼脂 补加蒸馏水至100ml 4.灭 菌：培养基分装（分装前调PH≈7.6中性或微碱性）后高压蒸汽灭菌；培养皿干热灭菌。 5.倒平板：50℃、酒精灯火焰附近 拔 灭口 开皿、倒培养基、关皿 冷却后倒置 加热 搅拌 加热搅拌 溶解 防止糊底 溶化 例题：关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（　　） 　A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 　B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸 　C.待培养基冷却至50℃左右时，进行倒平板 D.待平板冷却凝固约5min～10min后，将平板倒过来放置 A 方法一：平板划线法 方法二：稀释涂布平板法 核心目的：防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。 第二步：纯化大肠杆菌 接种 定义：接种环、连续划线、稀释分散、菌落 步骤:1.接种环灼烧灭菌 2.冷却接种环，开棉塞 3.试管口灭菌（灭口） 4.沾取菌液 5.灭口，塞棉塞 6.划线接种 7.接种环灭菌，连续划线五个区域 8.倒置培养 一、平板划线的操作方法 定义：梯度稀释、涂布、菌落 方法二：稀释涂布平板法 步骤:1.稀释操作： 1 试管灭菌编号 2 移液管、稀释菌液 3 重复操作，完成5支试管的稀释 2.涂布平板： 1 涂布器酒精消毒 2 取菌液 3 燃尽酒精 4 涂布分散菌液 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯 2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？