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版纳小耳猪伪狂犬病感染状况调查研究 　　摘要 为了解规模化养殖和农户散养版纳小耳猪群中伪狂犬病的感染情况，按流行病学随机抽样方法，从2个规模场、7个自然村采集152份血液样品，对病原的抗原、抗体进行检测。2个规模化场均接种了猪伪狂犬疫苗，但所有散养户均未接种。因此，规模养殖场的猪群总抗体阳性率较高，养殖场1抗体阳性率94.1%（32/34），感染性抗体阳性率17.6%（6/34）；养殖场2抗体阳性率为92.0%（46/50），抗原阳性率12.0%（6/50），而散养户感染性抗体阳性率较高为55.9%（38/68），抗原阳性率17.6%（12/68）。结果表明：猪伪狂犬病病原在版纳小耳猪群中不同程度地存在。规模化饲养的猪群免疫合格率高于散养户。从抗原检测结果来看，规模化场的发病率也低于散户。要控制该病的流行，应重点在散户中推广疫苗接种，提高散户的免疫接种效果。 　　关键词 版纳小耳猪；伪狂犬病；规模化养殖场；散养；感染状况 　　中图分类号 S858.28 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）06-0274-01 　　伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由疱疹病毒科中的猪I型疱疹病毒所引起的多种家畜、伴侣动物、实验动物和野生动物以发热、奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为主要症状的高度致死性疫病[1]。伪狂犬病病毒感染种猪所致的繁殖障碍一般要经过一段时间才表现出来，到目前为止对猪伪狂犬病尚无有效的治疗办法，被感染的猪只一旦发病，各种控制措施均难以立即奏效，所采取的各种措施往往要经过一个孕期才能验证其效果。目前，伪狂犬病成为引起猪繁殖障碍综合征的主要原因之一，给我国养猪业带来了巨大经济损失。该研究拟针对版纳小耳猪群中伪狂犬病毒病的感染状况进行调查，以了解相关病原在版纳小耳猪群中的流行状况，为该地区繁殖障碍性疾病的发生和流行提供参考数据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　采集了版纳辖区内2个规模化养猪场（养殖场1，养殖场2）和7个自然村（散养村1，散养村2，…，散养村7）散养的152份版纳小耳猪血清样品。所有血清均为无菌采集猪耳静脉或前腔静脉血液样品；采集后摆成斜面，放室温静置或离心析出血清，于-20 ℃冷冻保存待检。 　　1.2 试验方法 　　猪伪狂犬病gE-ELISA鉴别诊断试剂盒购自美国IDEXX生物科技公司，总抗体检测试剂盒购自武汉科前动物生物制品有限责任公司。操作过程严格按照试剂盒说明书。抗原检测，PCR 扩增所用引物见表1。 　　取DNA 4 μL，10×Ex Taq buffer 2.5 μL，2.5 mmol/L dNTP 1 μL，10 pmol/mL外引物各0.5 μL，Ex Taq DNA聚合酶0.25 μL（5 U/μL），最后加dH2O补足体积至25体系，进行PCR反应。PCR反应过程为：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性40 s，53 ℃退火40 s，72 ℃延伸40 s，扩增35个循环，最后72 ℃延伸10 min结束反应。 　　2 结果与分析 　　2个规模化养殖场均接种了猪伪狂犬疫苗，但所有散养户均未接种。因此，规模养殖场的猪群总抗体阳性率较高，养殖场1总抗体阳性率94.1%（32/34），感染性抗体阳性率为17.6%（6/34）；养殖场2总抗体阳性率为92.0%（46/50），感染性抗体阳性率为64.0%（32/50）。而散养户感染性抗体阳性率55.9%（38/68），总抗体阳性率为76.5%（52/68）（表2）。 　　用所设计的针对 PRV基因的引物，对所采集的组织样品进行PCR扩增。然后在1%琼脂糖凝胶中电泳，阳性样品扩增结果可以见到清晰的目的条带（大小为541 bp）（图1）。养殖场1抗原阳性率11.8%（4/34）；养殖场2抗原阳性率12.0%（6/50），散养户感染性抗原阳性率17.6%（12/68）。 　　3 结论与讨论 　　研究结果表明，伪狂犬病在版纳小耳猪群中不同程度（下转第284页） 　　地存在。规模化饲养的猪群免疫合格率高于散养户。从抗原检测结果来看，规模化场的发病率也低于散户。要控制该病的流行，应重点在散户中推广疫苗接种，提高散户的免疫接种效果。 　　调查表明，猪伪狂犬病仍然是版纳小耳猪母猪繁殖障碍的一大因素，同时也是呼吸道疫病综合征的原发性病原。随着猪场对免疫预防的重视，开始使用高质量的疫苗，2种病的发病率有所降低，但它们向非典型性发展，不少猪场种猪常呈隐性感染或带毒。 　　虽然2个规模化养猪场均已注射猪伪狂犬病疫苗，但是保护力不高，因为猪场不分析免疫后的抗体效价，而是盲目地照抄照搬某一免疫程序，造成免疫失败而导致猪伪狂犬病的发生。另外，由于PRV广泛地存在于母体、胎儿、胎盘及子宫分泌物中，所以分