圆二色谱报告汇编.docVIP

一、实验目的 1. 圆二色性； 2. 圆二色光谱的原理与应用 4. 圆二色光谱的实验技术与操作。 一束平面偏振光可以看成是由两个振幅和速度相同而螺旋前进方向相反的圆偏振叠加而成。两圆偏振光彼此对映，互为镜像。的椭圆度θθ与在该波长处对左右圆偏振光的摩尔吸光系数之差 Δε 成正比。将θ或Δε对波长作图，即得到圆二色光谱。 图1 右圆偏振光 a 、左圆偏振光 b 及平面偏振光示意图，水平箭头表示光的传播方向。 θ表示椭圆偏振光的椭圆率角，tanθ OE/OA″≈ θ。 圆二色光谱的英文名称为Circular Dichroism，简称CD光谱。其光谱仪的基本测试原理是——通过入射圆偏振光的波长变化，测定手性样品的左圆偏振光和右圆偏振光摩尔消光系数之差Δε。由于CD光谱反映了光和分子间的能量交换，因而只能在有最大能量交换的共振波长范围内测。CD光谱可用于分析一般电子光谱所不能体现出来的能级跃迁的细节，是讨论手性化合物电子跃迁性质的重要表征手段。 当测试条件严格一致时，一对对映异构体的CD光谱呈镜像对称。通常采用光学纯的样品（即仅含单一对映体）进行CD光谱的测定，可由实验值 θ 根据浓度 c、光程长 l 求出该纯样的Δε 。在严格相同的测试条件下，测定未知样品的CD光谱，可根据实验值求出未知样的Δε’ 。根据上述数据可估算未知样品的对映体过量值（Enantiomeric Excess，简称ee%）。当样品溶解性差、溶剂背景干扰、溶解过程中绝对构型发生变化时，固相CD光谱测试很有必要。通常对纯样进行CD光谱的测试，可在样品绝对构型与CD信号间建立关联。对同物质未知ee%值的样品，可通过CD光谱，简单判断其哪种对映体过量。此外，光谱还可结合其他结构表征手段用于关联确定手性化合物的绝对构型，或检测靶向分子与DNA等生物大分子的相互作用。 图3 圆二色光谱仪示意图 如图3所示，圆二色光谱仪由氙灯光源、单色系统、偏振系统、样品台、光电倍增管等部件组成。具体参数如下： 光源 两种标配灯: 150瓦氙灯及150瓦汞氙灯可同时装置。 分离式光源装置205nm以上测量不需使用氮气波长205nm以下氮器使用量3升/每分钟。 单色器 光 栅： 双光栅 1200条/mm。 波长 設定 范围： 1 至 00 nm。 光学系统 全反射消色差的光学系统氟化镁（MgF2 ）偏振光学组件具参比二极管检测器。 数据采集及数据分析 采 样 速 率： 10 微秒/每点-1000 秒/每点。 波长扫描速度： 最高 1200nm/min 0.05秒 to 20秒/每点 。 圆二色测量噪声： 0.01 mdeg° 2nm 1sec 。 基 线 稳 定 性： 0.01 mdeg°/小时。 CD 分 辨 率： 最低达0.0006mdeg。 CD 测 量 范 围： 最高达±6500mdeg。 （1）、药品：KCl 光谱纯 、纯手性试剂、无水乙醇（A.R.）。 （2）、仪器：MOS-450圆二色光谱仪，分析天平，压片机（包括压模等），玛瑙研钵。 2、实验步骤： 电源 依次打开ALX-250光源开关（先开光源盒背后开关，再开光源盒面板开关），MM-450电源点击电脑桌面上的图标，进入BioKine软件操作主界面。点击主界面的Device/Scanning Spectrometer，进入光谱扫描界面。输入到下方的Ex”处，。按钮变为，然后点击，自动调整HV电压，然后再点击按钮，锁定此电压值。点击主界面上方的按钮，Acquisition mode：选择测量模式CD Begin nm ：扫描初始波长 End nm）：扫描结束波长 Scan Repeat ：扫描次数 Acquisition duration：每个nm的测量持续时间，范围0.05s-20s。 Shutter Automatic mode：选择Always open PM gain*10：当在非常低的信号测量，可选择此项，进行信号的增益。 CD parameters：CD的灵敏度，根据信号的振幅设置，有四个不同的选项，1000、300、100和30 mdeg。以上参数都设置好后，点击OK按钮，参数设置完成，回到主界面。样品的测量再点击按钮关闭挡板，按钮变为将空白样品换成测样品。这时再点击打开挡板按钮变为，然后点击，自动调整HV电压，然后再点击按钮，锁定此电压值。点击主界面Acquisition control区域的按钮，二色谱谱图的选择主界面的File菜单下的Save As…。MM-450电源”状态； 挡板处于关闭状态：软件主界面下方显示处于灰色的“”状态； 对于固相样品测试，需移动光电倍增管的情况，光电倍增管需轻拿轻放，请避免剧烈振动。 光谱扫描时，请避免实验台面的剧烈震动。 实验结束后，固相样品的压片模具严禁在潮湿状态