酶工程2-4酶发酵动力学技术总结.pptVIP

第四节 酶发酵动力学 发酵动力学: 主要研究发酵过程中细胞生长速度、产物生成速度、基质消耗速度以及环境因素对这些速度的影响等。 酶发酵动力学: 细胞生长动力学、发酵产酶动力学 二、细胞生长动力学 在分批培养 batch culture 过程中，细胞生长一般要经历延迟期、指数生长期、减速期、静止期和衰亡期5个阶段。 莫诺德方程（Monod） 当D 0 的时候, 为分批发酵; 当D μ时, d X/ d t 为正值, 表明发酵液中细胞浓度不断增加, 随着细胞浓度增加, 限制性基质的浓度相对降低, 使比生长速率减小, 在比生长速率降低到与稀释速率相等的时候, 重新达到稳态; 当D μ时, d X/ d t 为0, 发酵液中细胞浓度保持恒定不变; 当D μ时, d X/ d t 为负值, 发酵液中的细胞浓度不断降低, 随着 细胞浓度降低, 限制性基质的浓度相对升高, 使比生长速率增大, 在比生长速率提升到与稀释率相同时, 建立新的平衡, 重新达到稳态; 而当D μm 时, 细胞浓度趋向于零, 无法达到新的稳态。 第五节 固定化微生物细胞发酵产酶 固定化细胞又称为固定化活细胞或固定化增殖细胞, 是指采用各种方法固定在载体上, 在一定的空间范围进行生长、繁殖和新陈代谢的细胞。 固定化细胞是在20 世纪70 年代后期才发展起来的技术。 固定化微生物细胞发酵产酶自1978 年开始研究以来, 取得可喜进展。 一、固定化细胞发酵产酶的特点 1. 提高产酶率 细胞经过固定化后, 在一定的空间范围内生长繁殖, 细胞密度增大, 因而使生化反应加速, 从而提高酶产率。 2. 可以反复使用或连续使用较长时间 固定化细胞固定在载体上, 不容易脱落流失, 所以固定化细胞可以进行半连续发酵, 反复使用多次; 也可以在高稀释率的条件下连续发酵较长时间。 例如：固定化细胞进行乙醇、乳酸等厌氧发酵, 可以连续使用半年或更长时间; 固定化细胞发酵生产α 淀粉酶等, 也可以连续使用30 天以上。 3. 基因工程菌的质粒稳定, 不易丢失 研究表明, 由于有载体的保护作用, 固定化基因工程菌质粒的结构稳定性和分裂稳定性都显著提高。 4. 发酵稳定性好 细胞经过固定化后, 由于受到载体的保护作用, 使细胞对温度、p H 值的适应范围增宽; 对蛋白酶和酶抑制剂等的耐受能力增强, 所以能够比较稳定地进行发酵生产。 这一特点使固定化细胞发酵的操作控制变得相对容易, 并有利于发酵生产的自动化。 5. 缩短发酵周期, 提高设备利用率 固定化细胞经过预培养、生长好以后, 才转入发酵培养基进行发酵生产, 很快就可以发酵产酶, 而且能够较长时间维持其产酶特性, 因此可以缩短发酵周期, 提高设备利用率。 6. 产品容易分离纯化 固定化细胞不溶于水, 发酵完成后, 容易与发酵液分离, 而且发酵液中所含的游离细胞很少, 这就有利于产品的分离纯化, 从而提高产品的纯度和质量。 7. 适用于胞外酶等胞外产物的生产 由于固定化细胞与载体结合在一起, 所以固定化细胞一般只是用于胞外酶等胞外产物的生产。 * * 细胞生长曲线 O-A 延迟期 A-B指数生长期 B-C减速期 C-D 静止期 D-E 衰亡期 在培养过程中, 细胞生长速率与细胞浓度成正比: 当培养物中只有一种限制性基质，而不存在其他限制生长的因素时，μ为此限制性基质浓度的函数: Rx ———细胞生长速率 X ———细胞浓度 μ———比生长速率 S ——— 限制性基质的浓度 μm ———最大比生长速率 KS ———莫诺德常数 0 cS KS 比生长速率达到最大比生长速率一半时的限制性基质浓度,即是说,当μ 0.5μm 的时候,S Ks。 当Sm KS的时候,μ μm。 在连续全混流反应器的发酵过程中，不断流加培养液并不断地排出同体积发酵液。在稳态时，游离细胞连续发酵的生长动力学方程可表达为： D —— 稀释率,是指单位时间内,流加的培养液与发酵容器中发酵液体积之比,一般以h-1为单位。 稀释率可以在0 与μm 之间变动 莫诺德方程与酶反应动力学的米氏方程相似。最大比生长速率μm和莫诺德系数Ks也可由双倒数作图法求出。 双倒数作图法求出μm 和Km 一、酶生物合成的模式 细胞在一定条件下培养生长, 其生长过程一般经历调整期、生长期、平衡期和衰退期4 个阶段。 ——— 总细胞浓度 ? ? 活细胞浓度 0 — A, 调整期 A — B, 生长期 B— C, 平衡期 C — D, 衰退期 细胞生长曲线 根据酶的合成与细胞生长之间的关系，可将酶的生物合成分为4种模式，即： 同步合成型 生长偶联型—— 中期合成型 部分生长偶联型——延续合成型 非生长偶联型 —— 滞后合成型 酶生物合成的模式 ———.