UPLC法快速测定石杉碱甲片中石杉碱甲的含量.docVIP

UPLC法快速测定石杉碱甲片中石杉碱甲的含量 【摘要】目的：建立超高效液相色谱（UPLC）法测定石杉碱甲片中石杉碱甲的含量。方法：采用UPLC法测定，ACQUITY UPLC？?RBEH C18色谱柱，甲醇-0.1%乙酸铵溶液（30：70）为流动相，柱温：30℃，流速：0.4 mL.min-1，检测波长：310nm，进样量1μL。 结果：在1.5～10 ng范围内线性关系好（r 0.9999 ），平均回收率为100.11%，RSD 0.89%。结论：该方法准确度、精密度、稳定性及重现性好，可作为含量测定的可靠方法。 【关键词】石杉碱甲，含量测定，UPLC 前言：石杉碱甲片，其主要成份石杉碱甲。石杉碱甲是从我国中草药蛇足石杉中分离出的一种生物碱之一，为强效可逆性中枢乙酰胆碱酯酶抑制剂，主要用于治疗各种记忆障碍。经临床证明，其与喹硫平联合使用，对精神分裂症，阿尔茨海默记忆障碍有明显治疗作用。 超高效液相色谱（UPLC）与HPLC具有相同分离原理，但比传统的HPLC有更高的分离能力，对药物分析技术有极大促进作用。 本文建立UPLC法测定石杉碱甲片中石杉碱甲含量的方法，并进行方法学验证，结果显示该方法准确、精密、重复性及稳定性好，可作为含量测定的可靠方法。 1仪器与试剂 1.1仪器。超高效液相色谱仪（ACQUITY？?RUPLC，美国Waters）：ACQUITY Biernary Solvent Manager系统，ACQUITY Sample Manager自动进样器，ACQUITY TUV Detector检测器，天平（XS205DU， Mettler Toledo）；0.22μm微孔滤膜（上海月旭）等。 1.2试剂。石杉碱甲对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100243-201202）；石杉碱甲片（河南太龙药业股份有限公司，生产批号131107；140404）；甲醇，乙腈（色谱纯、美国J.T.Baker）其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件。色谱柱为Acquity UPLC BEH C18色谱柱（50mm×2.1mm，1.7μm）；流动相：甲醇-0.1%乙酸铵溶液（30：70）；流速：0.4mL.min-1；柱温：30℃；检测波长：310nm；进样量1μL。 2.2 溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备。精密称取石杉碱甲对照品10.23mg，置容量瓶中， 0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至200ml，摇匀，得对照品贮备液。精密量取贮备液5mL，置50mL容量瓶，用0.01mol/L盐酸稀释并定容，得5μg.mL-1的对照品溶液。 2.2.2供试品溶液的制备。 取石杉碱甲片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于石杉碱甲100μg），置20mL容量瓶，加0.01mol/L盐酸适量，超声溶解，0.01mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液。 2.3 方法学考察 2.3.1专属性考察。 按上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂各1μL注入色谱仪，结果显示石杉碱甲与其他组分可达到基线分离，说明样品中其他组分不干扰测定。UPLC色谱图见图1。 2.3.2 线性试验。取2.2.1项下石杉碱甲对照品溶液，过滤，依次进样0.3、0.5、1.0、1.5、2.0μL，按2.1项色谱条件进行测定，n 3。以进样量（ng）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，方程为：A 46837m+4662.4，（r 0.9999），结果表明石杉碱甲在1.5～10ng范围内具有良好的线性关系。 2.3.3精密度试验 取2.2.1项下石杉碱甲对照品溶液，过滤，每次进样1.0μL（n 6），测峰面积，RSD为0.14%，说明仪器精密度良好。 2.3.4稳定性试验 取含量测定项下石杉碱甲片供试品溶液，过滤，每隔2h进样1次，进样量1.0μL，测峰面积，RSD 0.61%（n 6）。说明供试品溶液在10h内具有良好的稳定性。 2.3.5重复性试验 取同批号样品，按2.2.2项所述供试品溶液制备方法配制石杉碱甲片供试品溶液6份，过滤，分别注入样品瓶，取1.0μL进样，测峰面积，RSD 0.76%，说明重复性良好。 2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的石杉碱甲供试品药粉3份，按标示量的100%加入2.2.1项制备的对照品溶液，制备加样回收供试品溶液。按2.1项色谱条件测定，平均回收率100.11%，RSD 0.89%，说明该方法具有良好的准确度。 2.4样品含量测定 随机取石杉碱甲片2批，抽取6份样品，按2.2.2项所述方法制备供试品溶液，取续滤液，按2.1项色谱条件测定，记录峰面积，计算石杉碱甲的含量（n 3），结果见表1。 3讨论 3.1方法选择 《中国药典》2010年版对石杉碱甲