超高压液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS)测定鱼肉中磺胺类兽药残留的基质效应.docVIP

超高压液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS)测定鱼肉中磺胺类兽药残留的基质效应 　　摘 要：采用提取后添加法从提取溶剂、净化方法、同位素内标、基质标曲等方面对超高压液相色谱-串联质谱法测定鱼肉中的磺胺类兽药残留进行基质效应的研究。结果表明：以乙腈为提取溶剂，经MCX固相萃取柱净化和液液萃取净化可以降低基质效应的影响，采用基质添加标准曲线和同位素内标可以对基质效应的影响进行补偿。 　　关键词：液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)；鱼肉；磺胺类兽药；基质效应 　　中图分类号：O657.6 文献标志码：A 文章编号：1001-8123(2013)10-0017-04 　　液相色谱-质谱联用(LC-MS-MS)技术以其操作简便、准确度和灵敏度高、选择性强等优点成为各种兽药残留的确证方法[1-4]。但复杂样品共提取基质成分和试样前处理引入的外来杂质会严重抑制或增强目标分析物在喷雾接口处的离子化，从而影响到检测的选择性和灵敏度，进而影响到分析结果的准确度和精密度[5-8]。基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰称为基质效应[9-10]。磺胺类兽药的残留检测中存在较强的基质效应，特别是采用LC-MS-MS进行多残留快速筛查[11-12]，但目前的相关研究较少。本研究以鱼肉中磺胺类兽药残留为研究对象，建立超高压液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法(UPLC-ESI-MS-MS)测定磺胺类兽药残留的方法，利用提取后基质添加法从提取溶剂、净化方法、使用内标等方面进行基质效应的研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　鱼肉样品为市售产品； 　　磺胺脒(胍)、磺胺、磺胺索嘧啶、磺胺醋酰、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺甲恶唑、磺胺二甲异恶唑、磺胺喹?啉、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺硝苯，2种内标(13C6-磺胺甲基嘧啶、D4-磺胺嘧啶) 德国Dr. Ehrenstorfer GmbH公司；Cleanert MAS-Q试剂 博纳艾杰尔公司；混合型阳离子交换(MCX)固相萃取柱 美国Waters公司；乙腈、甲醇、正己烷均为色谱纯；甲酸、无水硫酸钠、氯化钠均为分析纯。 　　1.2 仪器及设备 　　1290超高压液相色谱仪 美国Agilent公司；API 4000＋串联四级杆质谱仪 美国AB公司；J-E高速冷冻离心机 美国Beckman公司；5418R小型低温离心机 艾本德中国有限公司；氮吹仪 美国Organomation公司；R-205旋转蒸发仪 瑞士Büchi Manschette公司；KQ-500DB型数控超声波清洗器 宁波新芝生物科技股份有限公司；Elix超纯水仪 美国Millipore公司；T18组织匀浆机 德国IKA公司；全自动固相萃取仪 北京普立泰科仪器有限公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 标准溶液配制 　　分别准确称取10mg标准品于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配成浓度为1000mg/L的标准储备液，置于－20℃冰箱内避光保存。分别精密吸取上述储备液各适量，置同1容量瓶中，用甲醇-0.1%甲酸水溶液(1:9，m/m)，稀释成质量浓度为1000ng/mL的标准工作溶液，置于 　　－18℃冰箱内避光保存。 　　1.3.2 不同溶剂提取方法的比较 　　称取空白罗非鱼肉5g，匀浆后分别加入20mL甲醇、乙腈、乙酸乙酯作为提取溶剂，10000r/min均质5min，超声5min，加20g无水硫酸钠，4℃条件下10000r/min离心10min，取上清液10mL，40℃条件下氮气吹干后用10mL甲醇-0.1%甲酸水溶液(1:9，m/m)复溶，4℃条件下 　　13000r/min离心10min，用上清液配制混合标样质量浓度为5.0ng/mL的基质标准溶液。每种溶剂设置3个平行。 　　1.3.3 不同净化方法的比较 　　固相萃取净化法参照SN/T 2580―2010《进出口蜂王浆中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》[13]，MCX固相萃取柱使用前采用5mL甲醇和5mL水活化，分别取1.3.1节中的5mL待净化液上样。上样后用5mL甲醇-水(1:1，m/m)淋洗，抽干后用5%氨化甲醇5mL洗脱。洗脱液在水浴中氮吹至干，用1mL乙腈-0.1%甲酸溶液(1:4，m/m)复溶，过0.22μm滤膜。配制混合标样质量浓度为5.0ng/mL的基质标准溶液。 　　液-液萃取法参照GB/T20759―2006《畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱-质谱法》[14]，取5mL 1.3.1节中的待净化液加乙腈饱和的正己烷5mL，旋涡振荡30