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发酵工业菌种保藏 菌种退化：指生产菌种或选育过程中筛选出来的较优良菌株，由于进行接种传代或保藏之后，群体中某些生理特征和形态特征逐渐减退或完全丧失的现象。 目的代谢物合成能力降低，产量下隆，有的则是发酵力和糖化力降低。 退化原因 基因突变 连续传代 酶合成的调节 诱导：能促进酶生物合成的调节。 阻遏：当代谢中某末端产物过量时，通过阻遏作用来阻碍代谢途径中包括关键酶在内的一系列酶的生物合成，从而控制代谢以减少末端产物的合成。 菌种代谢生理 初级代谢：把微生物产生的对自身生长和繁殖必需的物质称为初级代谢产物，而产生这些物质的代谢体系或过程称为初级代谢。 次级代谢产物：由生物体合成，但对其自身的生长、繁殖和发育并没有影响的一类物质，如抗生素、生物碱、色素、毒素等。 4 菌种的分离 平板划线分离法 稀释分离法 简单平板分离法 涂布分离法 毛细管分离法 小滴分离法 菌种保藏方法 斜面低温保藏法：低温 矿油封藏法：低温、缺氧、缺营养。 冷冻真空干燥法：低温、干燥、缺氧 液氮超低温保藏法：超低温 发酵工业的种子制备 接种种龄和接种量 接种龄 种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间 接种量 接种量指的是移入的种子悬浮液体积和接种后培养液体的体积的比例 种子质量的判断 最常用的工业微生物 细菌 醋杆菌属的醋化醋杆菌、弱氧化醋杆菌 乳酸杆菌 枯草杆菌 丙酮丁醇梭菌 大肠杆菌 谷氨酸棒状杆菌 最常用的工业微生物 酵母菌 酿酒酵母 假丝酵母属 产朊假丝酵母 解脂假丝酵母 热带假丝酵母 毕赤酵母属、汉逊酵母属 最常用的工业微生物 霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉 单细胞或多细胞丝状真菌，发酵工业中应用最多的是青霉、曲霉、毛霉、木霉等 最常用的工业微生物 放线菌 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 米苏里游动放线菌 未培养微生物 定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方法还未获得纯培养的微生物，其在自然环境微生物群落中占有非常高的比例，约为99％。 研究方法 模拟自然培养法: 原位培养、培养条件优化、 单细胞操作 宏基因组分析法 1. 菌种选择的总趋势 野生菌→变异菌 自然选育→代谢控制育种 诱发基因突变→基因重组的定向育种 设计筛选方案时必须考虑两个要点 选择性 灵敏度 μ A B S0 基质浓度对A、B两种菌的比生长速率（μ）的影响 当SS0时，富集什么菌株？ 当SS0时，富集什么菌株？ 代谢工程的定义 利用多基因重组技术有目的地对细胞代谢途径进行修饰、改造，改变细胞特性，并与细胞基因调控、代谢调控及生化工程相结合，为实现构建新的代谢途径，生产特定目的产物而发展起来的一个新的学科领域。 又称作途径工程，是多基因的基因工程。  代谢工程发展基础 代谢网络理论：是把细胞的生化反应以网络整体，而不是孤立地来考虑。 代谢网络分流处的代谢产物称为节点，其中对终产物合成起决定作用的少数节点称为主节点。 根据节点下游分支的可变程度，节点分为： 柔性节点： 解除一个分支的反馈抑制可提高该分支下游产物的产量。 半柔性节点：须降低主分支的酶活并同时提高次分支的酶活或解除其反馈抑制，才可提高次分支下游产物的产量。 刚性节点：其下游各分支的比例不易改变。 定义：菌种的扩大培养就是把保藏的菌种，即砂土管，冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化，再经过扁瓶或摇瓶和种子罐，逐级扩大培养后达到一定的数量和质量的纯种培养过程。这些纯种的培养物称为种子。