Chapter3_酶的提取与分离纯化(上)概览.pptVIP

等密度梯度离心（沉降平衡离心） 根据颗粒的密度不同而进行分离。 当欲分离的不同颗粒密度范围在离心介质密度范围内时，在离心力场下，不同浮力密度的颗粒或下沉，或上浮，只要时间足够长，就可以一直移动到与其密度恰好相等的位置（等密度点），形成区带。 离心方法的选用 常用的介 质：氯化铯、硫酸铯、溴化铯等。 特点： 1 介质的密度梯度范围包括所有待分离物质的密度； 2 适于分离沉降系数相近，但密度不同的物质。 离心方法对比 差速离心： 属于动力学方法，关键在于选择适合于各分离物的离心力。 等密度梯度离心： 测定颗粒浮力密度的静力学方法，关键在选择氯化铯浓度，使之包括待分离物的密度范围 密度梯度离心： 兼有以上两种方法的特点，关键在于制备优质的密度梯度溶液。 共同点： 都是预先将介质铺成梯度。 差异： 所依赖的基础、离心时间、转速及颗粒与周围介质的密度是否相等诸方面是有一定差别。 速率区带离心和等密度区带离心 速度区带离心法 等密度离心法 沉降速度主要依赖颗粒形状和大小 沉降平衡主要依赖颗粒密度，与形状和大小无关 离心时间较短，待大颗粒到达管底前停止离心。 颗粒沉降速度不为零，若延长离心时间，颗粒会沉管底。 离心时间与液柱长短有关（一般16～18小时）。 每种颗粒的沉降速度均为零，延长离心时间也不再下沉。 转速较高（ 50,000rpm 转速较低 50,000rpm 颗粒密度不等于周围介质密度 沉降平衡时，颗粒密度等于周围介质密度 3.3 酶的分离方法 （1） 沉淀分离 （2） 离心分离 （3） 过滤与膜分离 （4） 层析分离 （5） 电泳分离 （6） 萃取分离 过滤：借助于过滤介质将不同大小、不同形状的物质分离的技术过程。 过滤介质多种多样，常用的有滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属和各种高分子膜等，可以根据需要选用。 过滤 非膜过滤：采用高分子膜以外的物质作为过滤介质 膜过滤：采用各种高分子膜为过滤介质 3 过滤与膜分离 过滤的分类及其特性 根据过滤介质截留的物质颗粒大小不同 类别 截留颗粒大小 截留的主要物质 过滤介质 粗滤 2μm 酵母、霉菌、动植细胞、固形物等 滤纸、滤布、纤维多孔陶瓷、烧结金属等 微滤 0.2～2μm 细菌、灰尘等 微滤膜、微孔陶瓷 超滤 20?～0.2μm 病毒、生物大分子等 超滤膜 反渗透 20? 生物小分子、盐、离子 反渗透膜 膜分离：借助于一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质进行分离的技术。 膜分离 加压膜分离 微滤 超滤 反渗透 电场膜分离 电渗析 离子交换膜电渗析 扩散膜分离 透析 薄膜作用：选择性地让小于其孔径的颗粒或分子通过，而把大于其孔径的颗粒截留。 薄膜材料：由丙烯腈、醋酸纤维素、赛璐玢以及尼龙等高分子聚合物制成的高分子膜。 根据膜材料和进料液的特性，商品化的膜产品通常采取如下几种结构形式： 管式、中空纤维、卷式、平板式。 四种常用膜分离技术的基本特征 膜技术 截留物尺寸nm （分子量） 推动力 分离机理 微滤MF 20 40,000 压力差， 100kPa 筛分 超滤UF 1～20 10,000--40,000 压力差， 100kPa 筛分 纳滤NF 1 100～1000 压力差， 1000kPa 优先吸附、表面电位 反渗透RO 100 压力差， 1000kPa 优先吸附、溶解扩散 四种常用膜分离过程的截留特性 * Chapter 3 酶的提取与分离纯化 酶的提取与分离纯化是酶的生产中最早采用并一直沿用至今的生产方法，在采用其他方法进行酶的生产过程中，也必须进行酶的提取和分离纯化。 酶的提取与分离纯化 将酶从细胞或其他含酶的原料中提取出来，再于杂质分开，而得到所要求的酶制品的技术。 酶的提取与分离纯化 许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。 机械破碎 物理破碎 化学破碎 酶解破碎 JY92-II D超声波 细胞粉碎机 细胞破碎珠 高压细胞破碎机 DY89-I型 电动玻璃匀浆机 3.1 细胞破碎 机械破碎 捣碎法 研磨法 匀浆法 物理破碎 温度差破碎法 压力差破碎法 超声波破碎法 化学破碎 有机溶剂： 甲苯、丙酮 丁醇、氯仿 表面活性剂： Triton、Tween 酶促破碎 自溶法 外加酶制剂法 通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。 通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎。 通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎 通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎 细胞破碎方法及其原理 酶的提取: 指在一定的条件下，用适当