第五章工业微生物产生菌的分离筛选概览.pptVIP

第五章 工业微生物产生菌的分离筛选 第一节 含微生物样品的采集 第二节 含微生物样品的富集培养 第三节 好养微生物的分离 第四节 厌氧微生物的分离 第五节 产目的产物的野生菌的筛选和菌株鉴定 第六节 极端环境微生物的分离筛选 第七节 生物可降解塑料菌株的分离筛选 菌株分离（separation）就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需的微生物的过程。 工业微生物产生菌的筛选一般包括两大部分：一是从自然界分离所需要的菌株，二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。 菌种可从以下几个途径进行收集和筛选： （1）向菌种保藏机构和个人索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。 国际承认的培养物保藏单位 保藏单位 简称 所在国家 保藏范围澳大利亚国家分析试验室 AGAL 澳大利亚 微生物菌种比利时微生物保藏中心 BCCM 比利时 大部分微生物菌种保加利亚菌种保藏库 NBIMCC 保加利亚 微生物菌种中国典型培养物保藏中心 CCTCC 中国 几乎所有的培养物中国普通微生物菌种保藏中心 CGMCC ? ?中国 普通菌种捷克微生物保藏所 CCM 捷克 普通微生物菌种法国微生物保藏中心 CNCM 法国 几乎所有的培养物德国微生物保藏中心 DSM 德国 普通微生物菌种匈牙利国家农业和 工业微生物保藏中心 NCAIM 匈牙利 工业菌种 日本国家生命科学 和人类技术研究所 NIBH 日本 几乎所有的培养物荷兰真菌保藏所 CBS 荷兰 真菌类韩国细胞系研究联盟 KCLRF 韩国 动植物细胞系韩国微生物保藏中心 KCCM 韩国 微生物菌种 菌株的分离和筛选一般可分依序以下几个步骤: 采样 富集 分离 产物鉴别 生化鉴定 第一节 含微生物样品的采集 一、从土壤中采样 1克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）＞放线菌（107）＞霉菌（106）＞酵母菌（105）＞藻类（104）＞原生动物（103） （一）根据土壤特点 1．土壤有机质含量和通气状况 采土样最好的土层是5-25cm、一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。总的来说酵母菌分布土层最浅，约5-10 cm；霉菌和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。厌氧菌分布较深。 2．土壤的酸碱度和植被状况 3．地理条件：南方、北方 4．季节条件 ：7—10个月 （二）采样方法 用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5-25cm处的土样10～25 g，装入事先准准备好的塑料袋内扎好。给塑料袋编号并记录地点、土壤土质、植被名称、时间及其他环境条件。 北方土壤干燥．在10-30cm处取样。 一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。 样品较多时，可先采用选择性培养基做好试管斜面，随身带走。 二、根据微生物生理特点取样 1．根据微生物的营养类型 每种微生物对碳、氮源的需求不一样，分布也有差异。若需要筛选代谢合成某种化合物的微生物，从大量使用、生产或处理这种化合物的工厂附近采集样品，容易得到满意的效果。 森林、肉类加工厂、面粉厂、糖厂、柑橘、油田、化工厂等 不少微生物对碳源的利用是不完全专一的，如以油脂为碳源的某些脂肪酶产生菌同样也可以分解淀粉获得能源而生长。 2.根据微生物的生理特性 高温、低温、耐压、耐高渗等 三、特殊环境下采样 1．局部环境条件的影响 2．极端环境条件的影响 第二节 含微生物样品的富集培养 一、控制培养基的营养成分 1 根据环境条件选择合适的培养基 2、根据微生物的类型 3、根据微生物对环境的耐受范围具有可塑性的特点 抗性菌株、污染物分解菌） 二、控制培养条件 细菌、放线菌的生长繁殖要求偏碱（pH7.0-7.5 霉菌和酵母菌的生长繁殖要求偏酸（pH4.5-6.0） 温度、通气量等 三、抑制不需要的菌类 1、分离真菌时可在培养基中加入四环素等抗生素抑制细菌 2、分离放线菌时在培养基中加入10滴10%的酚或加青霉素、链霉素等抑制革兰氏阳性菌和阴性菌，或加入丙酸钠10ug/ml抑制霉菌和细菌生长 3、加入放线菌酮可以有效抑制真菌的生长 4、在富集培养基中加人适量的胆盐和十二烷基磺酸钠可抑制革兰阳性菌的生长，对革兰阴性菌无抑制作用 5、分离厌氧菌时，可加人少量硫乙醇酸钠作为还原剂 6、在分离除链霉菌以外的放线菌时，先将土样在空气中干燥，再加热到100℃保温1h，可简少细菌和链霉菌的数量。 7、分离耐高浓度酒精和高渗酵母菌时，可分别将样品在高浓度酒精和高浓度度甘蔗溶液中处理一段时间。杀死非目的微生物后再进行分离。 从土壤中分离芽孢杆菌 对于含菌数量较少的样品或分离